水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究
摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。
关键词：固定底物酶底物法 多管发酵法 粪大肠菌群
Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )
Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001
Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.
Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform
粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。目前,我国地表水及废水中粪大肠菌群的检测方法主要有传统的多管发酵法(MTF)及滤膜法(MF)。由于多管发酵法在检测水中粪大肠菌群存在准备工作量大，操作过程复杂，操作检测周期较长（需要48小时以上），干扰因素较多等因素，难以满足大批量样品的检测需要。
固定底物酶底物法是一种新型酶技术检测方法，采用粪大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β- D-galactopyranoside)使培养基呈黄色，以及其中的大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D- glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有粪大肠菌群，定量分析水样中粪大肠菌群数。
酶底物法已经被世界各国家及地方实验室和世界各组织机构认可，通过美国EPA认证，2003年从美国引入我国，我国卫生部在2006年也将酶底物法检测水
中大肠菌群列入国家标准《生活饮用水标准检验方法》。酶底物法检测水中的粪大肠菌群国家标准尚未正式列入。
本试验通过采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法，对大量实际水样中的粪大肠菌群同步检测，进行比对试验，试验结果进行比较分析。
1 实验部分
1.1材料与试剂
本试验中固定底物酶底物法所用MMO-MUG培养基、实验材料和仪器由爱德士公司提供的科立得（Colilert）试剂。
多管发酵法所用培养基与试剂按HJ/T 347-2007准备和配置。
1.2试验方法
固定底物酶底物法是一种基于MPN的方法，采用97孔定量盘，用无菌稀释瓶量取100mL水样（或经稀释后），加入（2.7±0.5）g MMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解，然后将100mL水样全部倒入97孔定无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，用程控定量封口机封口，放入44.5±0.5℃培养箱中培养24h。将培养24的定量盘取出观察，进行读数判断，如果孔穴内的水样变成黄色则为阳性，计算呈阳性反应的孔穴数，对照酶底物法97孔最可能数（MPN）表，查出其代表的粪大肠菌群最可能数，该结果为MPN/m L ,最终结果以MPN/L表示。
多管发酵法检测粪大肠菌群方法参见《水质粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）HJ/T 347-2007》。
2 结果与分析
检测结果见表1
表1 多管发酵法和酶底物法检测水中粪大肠菌群结果MPN/L
试验对柳江河15份地表水样品和15份污水厂废水样品共30份样品的检测
结果见表1，由表1可见，对两种方法检测粪大肠菌群的结果进行t检验，结果表明两种方法无显著性差异，是等效的，两种方法均适用于水中粪大肠菌群的检测。
3结论
本试验对不同水样采用底物酶底物法和多管发酵法同步检测水中的粪大肠菌群，实验表明两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异。与多管发酵法相比，固定底物酶底物法具有操作简便，检测时间较短（24h）, 准确度高，由于采用特异的酶技术，特异性高，可以减少杂菌的干扰，实验过程污染的可能性低，无二次污染等优点，酶底物法很好的弥补了传统方法的不足，可用于水中粪大肠的检测, 将固定底物酶底物列入水质粪大肠菌群测定的标准方法，是发展的趋势。
参考文献
[1]《水质粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）HJ/T 347-2007》
[S]国家环境总局发布，2007年3月
[2]国家环保局《水和废水监测分析方法》编委会. 水和废水监测分析方法[M]第四版.北京：中国环境出版社，2002
[3] U.S.EPA..Proposed approval of Colilert，Colilert-18，Colisure，Enterolert and Quanti-Tray for Ambient Water Testing [M]. Washengton DC: U.S.Federal Register，2001.
[4]环境水质量监测质量保证手册（第二版）[M]1994.264-266
水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)两种检测方法的比较研究
摘要：本文采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法对水中粪大肠菌群进行比对试验，比较两者检测结果的一致性。结果表明，两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异，与多管发酵法相比，酶底物法具有简便快速、结果准确、特异、实验过程污染的可能性低、无二次污染等优点。
关键词：固定底物酶底物法 多管发酵法 粪大肠菌群
Comparative Study on Two Detection Methods of Fecal Coliform in Water (Thermotolerant Coliforms )
Luo Yun Liuzhou Environmental Protection Monitoring Station, Guangxi 545001
Abstract: This paper conducts a comparative test on fecal coliform in water with Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique and traditional Multiple-tube fermentation technique and compares the consistency of detection results. The result shows that both methods have a good correlation in the consistency of results and there is no significant difference in statistical sense. Compared to multiple-tube fermentation technique, enzyme substrate technique has such advantages as simplicity, rapidness, accurate result, specificity, low possibility of pollution in the experimental process and secondary pollution avoided.
Key words: Defined Substrate Technology(DST) enzyme substrate technique; Multiple-tube fermentation technique; Fecal coliform
粪大肠菌群（耐热大肠菌群）是水质污染的重要指标之一。目前,我国地表水及废水中粪大肠菌群的检测方法主要有传统的多管发酵法(MTF)及滤膜法(MF)。由于多管发酵法在检测水中粪大肠菌群存在准备工作量大，操作过程复杂，操作检测周期较长（需要48小时以上），干扰因素较多等因素，难以满足大批量样品的检测需要。
固定底物酶底物法是一种新型酶技术检测方法，采用粪大肠菌群细菌能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β- D-galactopyranoside)使培养基呈黄色，以及其中的大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D- glucuronide）使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有粪大肠菌群，定量分析水样中粪大肠菌群数。
酶底物法已经被世界各国家及地方实验室和世界各组织机构认可，通过美国EPA认证，2003年从美国引入我国，我国卫生部在2006年也将酶底物法检测水
中大肠菌群列入国家标准《生活饮用水标准检验方法》。酶底物法检测水中的粪大肠菌群国家标准尚未正式列入。
本试验通过采用固定底物酶底物法与传统多管发酵法，对大量实际水样中的粪大肠菌群同步检测，进行比对试验，试验结果进行比较分析。
1 实验部分
1.1材料与试剂
本试验中固定底物酶底物法所用MMO-MUG培养基、实验材料和仪器由爱德士公司提供的科立得（Colilert）试剂。
多管发酵法所用培养基与试剂按HJ/T 347-2007准备和配置。
1.2试验方法
固定底物酶底物法是一种基于MPN的方法，采用97孔定量盘，用无菌稀释瓶量取100mL水样（或经稀释后），加入（2.7±0.5）g MMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解，然后将100mL水样全部倒入97孔定无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡，用程控定量封口机封口，放入44.5±0.5℃培养箱中培养24h。将培养24的定量盘取出观察，进行读数判断，如果孔穴内的水样变成黄色则为阳性，计算呈阳性反应的孔穴数，对照酶底物法97孔最可能数（MPN）表，查出其代表的粪大肠菌群最可能数，该结果为MPN/m L ,最终结果以MPN/L表示。
多管发酵法检测粪大肠菌群方法参见《水质粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）HJ/T 347-2007》。
2 结果与分析
检测结果见表1
表1 多管发酵法和酶底物法检测水中粪大肠菌群结果MPN/L
试验对柳江河15份地表水样品和15份污水厂废水样品共30份样品的检测
结果见表1，由表1可见，对两种方法检测粪大肠菌群的结果进行t检验，结果表明两种方法无显著性差异，是等效的，两种方法均适用于水中粪大肠菌群的检测。
3结论
本试验对不同水样采用底物酶底物法和多管发酵法同步检测水中的粪大肠菌群，实验表明两种方法在结果一致性方面相关性好，无统计学意义上的显著性差异。与多管发酵法相比，固定底物酶底物法具有操作简便，检测时间较短（24h）, 准确度高，由于采用特异的酶技术，特异性高，可以减少杂菌的干扰，实验过程污染的可能性低，无二次污染等优点，酶底物法很好的弥补了传统方法的不足，可用于水中粪大肠的检测, 将固定底物酶底物列入水质粪大肠菌群测定的标准方法，是发展的趋势。
参考文献
[1]《水质粪大肠菌群的测定 多管发酵法和滤膜法（试行）HJ/T 347-2007》
[S]国家环境总局发布，2007年3月
[2]国家环保局《水和废水监测分析方法》编委会. 水和废水监测分析方法[M]第四版.北京：中国环境出版社，2002
[3] U.S.EPA..Proposed approval of Colilert，Colilert-18，Colisure，Enterolert and Quanti-Tray for Ambient Water Testing [M]. Washengton DC: U.S.Federal Register，2001.
[4]环境水质量监测质量保证手册（第二版）[M]1994.264-266