０１６年３月２
第２７卷第２期
化 学 研 究ＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＨＥＭ
１８９
：／／ｈｔｔｈｘａ．ｃｂｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔｐｙｐ
纳米金比色法测定多西环素和土霉素
范淑敏＊曲 黎，魏燕丽，
（）河南科技学院新科学院，河南新乡４５３００３
采用紫外－可见分光光度计、摘 要：采用柠檬酸钠还原法合成粒径约１荧光分光光度计研３ｎｍ的纳米金粒子．究了纳米金粒子与多西环素／土霉素分子的相互作用；通过改变缓冲溶液、纳米金粒子用量、反应时间确定了比色法测定的最优反应条件．结果表明：在弱酸溶液中，多西环素／土霉素分子中的氨基官能团（得到电子－ＮＨ２）成为带电基团（使得纳米金粒子发生聚集，导致纳米金吸收光谱－ＮＨ３＋）并通过静电引力与纳米金粒子结合，发生红移和展宽，颜色由酒红色变成蓝色；在盐酸－柠檬酸钠的缓冲溶液中加入２ｍ反应时间为１Ｌ纳米金，０ｍｉｎ
－１
·Ｌ－１和０．的条件下测得多西环素和土霉素的线性范围分别为０．检出限（分０６～０．６６ｍ５９～８．８５ｍ３σ）ｇｇ·Ｌ，
·Ｌ－１．别为０．可靠，有望应用于食品分析和临床分析等领域．该方法前处理简单、灵敏、００８６、０．０８３８ｍ ｇ关键词：纳米金粒子；比色法；多西环素；土霉素中图分类号：Ｏ６５２．７
文献标志码：Ａ
（）文章编号：１００８－１０１１２０１６０２－０１８９－０６
Ｈｉｈｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｎｄｏｘｃｃｌｉｎｅａｎｄ ｇｙｙｙ
ｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅｂａｓｅｄｏｎｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ ｙｙｇｐ
＊
，ＷＥ，ＱＵＬｉＩＹａｎｌｉＦＡＮＳｈｕｍｉｎ
（ｉｎｋｅｏｌｌｅｅ，ｅｎａｎｎｓｔｉｔｕｔｅｃｉｅｎｃｅｎｄ ｅｃｈｎｏｌｏｉｎｘｉａｎ５３００３，ｅｎａｎ，ｈｉｎａ）ＸＣＨＩｏＳａＴＸＨＣ ｇｇｙ，ｇ４ｆ
）ｗＡｄｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ（ＧＮＰｓｅｒｅｓｎｔｈｅｓｉｚｅｄｔｈｒｏｕｈｓｏｄｉｕｍｃｉｔｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｗｅｌｌｉｓｅｒｓｅｄ－－ ｇｐｙｇｐｒａｔｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＵＶ－Ｖｉｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｅｃｔｒｏｈｏｔｏｍｅｔｅｒｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ ｐｐｐ
／ｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｍｕｔｕａｌｅｆｆｅｃｔｂｅｔｗｅｅｎＧＮＰｓａｎｄｄｏｘｃｃｌｉｎｅｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ．Ｔｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｙｙｙｙｐＨ，ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＧＮＰｓ．ａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｏｔｉｍｉｚｅｄｗｉｔｈｒｅａｒｄｔｏ ｐｐｐｇ
，－ＮＨ３＋），ｒｏｕｈｉｃｈｉｓｏｓｉｔｉｖｅｌｃｈａｒｅｄｉｎｗｅａｋｌａｃｉｄｉｃｍｅｄｉｕｍ（ｎａｍｅｌＴｈｅａｍｉｎｏ ｇｐ，ｗｐｙｇｙｙ ｎｔｅｒａｔｅｓｗｉｔｈｔｈｅｎｅａｔｉｖｅｃｈａｒｅｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｔｏｆｏｒｍａｂｉｅｒｂｉｎｄｉｎｉ ｇｇｇｇｐｇｇｇ
，ｕｔｒｅｓｕｌｔｉｎｔｈｅａｒｅａｔｉｏｎｏｆＧＮＰｓｗｉｔｈａｒｅｄｏｒｌｅｒｏｄｕｃｔｔｈｒｏｕｈｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｂｉｎｄｉｎ－－ｐ－ ｐｇｇｇｇｇｇｐ ｔｂｏｌｕｅｃｏｌｏｒｃｈａｎｅ．ＴｈｅａｂｓｏｒｔｉｏｎｂａｎｄｏｆＧＮＰｓｈａｄａｒｅｄｓｈｉｆｔａｎｄｂｒｏａｄｅｎｅｄ．Ｕｎｄｅｒｏｔｉ－－ ｇｐｐ
·，ｍａｌｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｅｓｏｆｔｈｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｅｎｓｏｒｗｅｒｅ０．０６－０．６６ｍ ｐｇｇ
－１
ａｏＬ－１ｎｄ０．５９－８．８５ｍｉｔｈｔｈｅｃｏｒｒｅｓｏｎｄｉｎｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（３ｆ０．００８６ａｎｄσ） ｇ·Ｌ ｗｐｇ
－１
０．０８３８ｍｏｒｄｏｘｃｃｌｉｎｅａｎｄｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｒｏｍｉｓｉｎ ｇ·Ｌｆｙｙｙｙｐｙｐｇ
，，ｃｏｓｔ．ｆｏｒｆｏｏｄｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｎａｌｓｉｓｏｗｉｎｔｏｔｏｉｔｓｓｉｍｌｅｒｅｌｉａｂｌｅｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｌｏｗ－ ｙｇｐ
：；；；ＫｅｗｏｒｄｓＧＮＰｓｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｄｏｘｃｃｌｉｎｅｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ ｙｙｙｙｙ）是含有ｅｔｒａｃｃｌｉｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｔ 四环素类抗生素（ ｙ
］１－３
土霉素和多并四苯基本骨架的一类广谱抗生素［．西环素都可以促进畜禽的生长，预防和治疗畜禽、鱼
收稿日期：０１６－０１－２２．２
）基金项目：国家自然科学基金（５１３０４０６４．
，女，讲师，作者简介：曲 黎（研究方向分析化学．通讯联９８１－）１
"
类的疾病，并可以增加产奶量．过量使用土霉素和多西环素造成动物产品中药物残留，影响人体健康，因此对动物源性食品中土霉素和多西环素的最高残留，
］４－６
目前，各个国家都有相应的标准及检测方法［我．
国对于土霉素和多西环素的测定，常用的方法有高效
］７
、）、电化学分析紫外分光光度法［液相色谱法（ＰＬＣＨ］］］０１－１２３８－１１１
、荧光法［和细菌抑制法［等．法［
：系人，Ｅ－ｍａｉｌｆｓｍｈｎｌｉｕｎ．ｃｏｍ．＠ａｙ
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９０１ 化 学 研 究２０１６年
纳米金比色法灵敏度高，简单、快速，是目前研究比较热门的分析测定方法．纳米金比色分析的主要优势是通过肉眼即可观察其颜色变化，简单快速，而且省去昂贵复杂的仪器，另外纳米金的消光系数高，灵金属离子敏度高，因而比色分析被用于蛋白质，ＮＡ，Ｄ和小分子等多种物质的检测，同时被用于蛋白质之
［４－１］６
目前，纳米金比间、．ＮＡ之间的相互作用研究１Ｄ］１７
色法已成功用于三聚氰胺、瘦肉精等物质的检测［．
道一致．球形纳米金粒子存在表面等离子吸收的特征峰，以水为空白，绘制纳米金吸收曲线，如图１所示，在５据此可计算纳米金的１８ｎｍ处有最大吸收，
［８］
由纳米金的紫外可见吸收光粒径，约为１．３ｎｍ１
谱图可以看出纳米金颗粒稳定，符合分析要求．
本文采用纳米金比色法测定土霉素和多西环素，测定结果与药典分析结果一致．此方法简单，测定速度快，而且不需要昂贵的仪器及大量的分析试剂，在食品分析及环境监测方面有很好的应用前景．
１ 实验部分
１．１ 仪器与试剂
上海仪电科学仪器有限公３ＨＳＣ酸度计（Ｐ－；司）日本岛津公３０１０紫外－可见分光光度计（Ｕ－；；司）日本日立）７０００荧光分光光度计（Ａ１２０４ＢＦＦ－；电子分析天平（上海佑科仪器有限公司）２恒温ＬＣ－；加热磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）ｅｃＴ－日本）ｎｔａｉＧ２２０ｓｗｉｎ高分辨型透射电子显微镜（．－
；多西环素，土四氯金酸（ｉｍａｌｄｒｉｃｈ公司）Ｓ－Ａｇ；盐酸－乙酸霉素对照品（中国药品生物制品检定所）钠缓冲溶液、盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液；多西环素片，），国药准字Ｈ和注射液（国剂（１ｇ１３０２１９４５１ｇ０．０．
）药准字Ｈ为药店随机购买；二次蒸馏水、２００６０４０５超纯水由实验室提供，所用试剂均为分析纯．２ 纳米金的合成５１．
用新配制的王水浸泡所用玻璃器皿２超纯４ｈ，精确量水洗后烘干备用．将氯金酸配成１％的溶液，将取１ｍＬ于１００ｍＬ棕色容量瓶中稀释至０．０１％．０．０１％的氯金酸溶液搅拌加热至沸后加入２．７５ｍＬ
２ｍｉｎ后颜色由紫红色变为１％的柠檬酸钠溶液，１酒红色，冷却至室温，用０．滤液于２μｍ超滤膜过滤，棕色试剂瓶中４℃保存备用．
３ 测定吸光度１．
取２．加入５ｍＬ新制纳米金于５ｍＬ容量瓶中，盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液，定容．取２ｍＬ纳米金，依
次加入不同体积的多西环素标准溶液（５０×１０－４１．ｇ ·ｍＬ－１）·ｍＬ－１）／土霉素标准溶液（，４８×１０－３１．ｇ
［］
图１ 纳米金的紫外－可见吸收光谱Ｆｉ．１ ＡｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ
ｇｐｐ
如图２所示，制ＥＭ）Ｔ 纳米金的透射电镜分析（
备的纳米金为球形，粒径均匀，分散良好．
图２ 纳米金的透射电镜图Ｆｉ．２ ＳＥＭｏｆＧＮＰｓ ｇ
２．２ 多西环素／土霉素测定原理
实验利用柠檬酸钠还原氯金酸制备纳米金，纳米金粒子表面包裹大量的柠檬酸根离子，由于静电排斥力纳米金不发生凝聚．在弱酸溶液中，多西环可以得到素／土霉素分子中的氨基官能团（－ＮＨ２），和纳米金粒子之间通过静电引力电子（－ＮＨ３＋）相互作用，引发纳米金凝聚．凝聚后的纳米金透射电镜图如图３所示，纳米金凝聚在一起，证明了纳米金粒子与四环素类抗生素之间的相互作用．凝聚后纳米金颜色由酒红色变为紫色最终变为蓝色，由于纳米金表面等离子共振，其吸收光谱发生红移和展宽，紫外－可见吸收光谱如图４，纳米金的最大吸收纳米金的共振峰由原来的５１８ｎｍ红移至６４０ｎｍ．散射光谱如图５所示，纳米金凝聚后，共振散射光谱
混合均匀，以水为参比分别测定吸光度．
２ 结果与讨论
２．１ 纳米金表征
纳米金呈酒红色，其表观颜色及粒径与文献报
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
第２期曲 黎等：纳米金比色法测定多西环素和土霉素１９１
增强．并且在一定范围内纳米金的聚集与
多西环素／土霉素的浓度呈现良好的线性关系，据此可建立简单、快速测定多西环素／土霉素的比色分析．
范围考查缓冲溶液对测定的影响．图６显示不同缓冲溶液对测定的影响，结果表明使用盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液的测定效果较好．图７显示缓冲溶液加入量对测定的影响，００μＬＨ为２．１的盐酸－柠檬酸钠缓冲７ ｐ
／值最大．其原因溶液引起纳米金凝聚的Δ（Ａ６Ａ５４０１８）是ｐ纳米金粒子表面所带负电荷较少，不
Ｈ过低时，利于结合多西环素
，而ｐＨ过高，多西环素中质子化的氢解离，使正电荷减少，也不利于结合．
·Ｌ－１多西环素０．５４ｍｇ
图３ 凝聚后的纳米金透射电镜图
Ｆｉ．３ ＳＥＭｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅ
ｇｐｙｙ
·Ｌ－１多西环素（））不存在多西环素（存在０．５４ｍａｂｇ
图４ 纳米金的紫外－可见吸收光谱图Ｆｉ．４ ＵＶ－Ｖｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓ
ｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ ｇｐｐ
／图６ 缓冲溶液对Δ（的影响Ａ６Ａ５４０１８）
ｉ．６ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｃｉｄｉｔｏｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅＦ ｙｙｇｙ
ｕｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｕ
ｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓｂ ｇｙ
（））·Ｌ－１多西环素不存在多西环素（存在０．ａｂ４８ｍｇ
图５ 纳米金的共振散射光谱图Ｆｉ．５ ＲＲＳｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ ｇｐ
／图７ 盐酸－柠檬酸钠加入量对Δ（的影响Ａ６Ａ５４０１８）ｓＦｉ．７ｆｆｅｃｔｏｆａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＨＣｌｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ－ Ｅ ｇ
２．３ 实验条件优化
将多西环素加入纳米金后，纳米金产生凝聚，其／来表示．凝聚程度可用Δ（在ｐＡ６Ａ５２．０～７．０Ｈ４０１８）
同时我们也考察了纳米金的用量对体系测定的
不同纳米金影响．改变纳米金的用量从１～３ｍＬ，
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９２１ 化 学 研 究２０１６年
／用量对应的Δ（值如图８所示，纳米金的Ａ６Ａ５４０１８）浓度增大时，其最大吸收峰值降低，当纳米金浓度高时，对仪器的染色比较严重，且对低浓度的多西环素变化不灵敏，当纳米金浓度低时，颜色变化不灵敏，
因此实验选择２ｍＬ纳米金．
图９考察了反应时间对测定的影响，连续测定结果表明：加入多西环素，０ｍｉｎ凝
聚程度最１ｈ，１
大，反应时间设为１０ｍｉｎ后基本不再变化，０ｍｉｎ．１
／图８ 不同纳米金用量对应的Δ（Ａ６Ａ５４０１８）／ｉ．８ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＧ
ＮＰｓｏｎΔ（Ａ６Ａ５Ｆ ｇ４０１８）
图９ 反应时间对吸收光谱的影响
／Ｆｉ．９ ＥｆｆｅｃｔｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎΔ（Ａ６Ａ５ ｇ４０１８）
２．４ 多西环素／土霉素的测定
在最优条件下，按照实验方法依次加入多西环／，由Δ（素标准溶液并测定其吸收光谱（图１Ａ６０）４０
，对多西环素的浓度作图（线性如图１Ａ５０所示）１８）
－１
线性回归方程为Δ范围为０．０６～０．６６ｍｇ·Ｌ，
／（多西环素，Ａ６Ａ５ｃ（＝０．０４２＋１．４８０４ｍ ｇ·４０１８）
·Ｌ－１，纳米金比色法测定多西环素具有检出限低，
灵敏度高，方法简单等优点，有望应用于食品分析领域．
最优条件下测定土霉素，测定其吸收光谱（图）·Ｌ－１范围内，，在线性回归方程为１．５９８．８５ｍ０１～ｇ
／，·Ｌ－１）土霉素，Ａ６Ａ５ｃ（＝０．２２２＋０．０７７ｍΔ（ｇ３０１８）
，·Ｌ－１检出限
（相关系数．０．９９９．０８３８ｍ０３σ） ｇ
，为０．检出限（相关系数为０．９９８，００８６ｍ３Ｌ－１）σ） ｇ
：·Ｌ－１．ａ０，０．０６，０．１２，０．３，０．４２，０．５４，０．６６ｍ→ｇｇ
图１０ 不同浓度多西环素存在下纳米金的紫外－可见吸收光谱图及相应的标准曲线ｉ．１０ ＵＶ－ＶｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅＦ ｇｐｐｐｙｙ
２．５ 常见物质的干扰
表１考察了金属离子、氨基酸及结构类似药物·Ｌ－１多西环素，的干扰．结果表明，对于０．该５４ｍｇ体系基本不受干扰，有较好选择性．
６ 回收率２．
研细，精密称取约一片多西取多西环素２０片，
环素质量，盐酸溶解后过滤，移至容量瓶，定容．进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶液，分别
－１
测定吸光度，加入标准溶液０．计０６、０．５４ｍｇ·Ｌ，
算回收率，实验重复３次．
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
第
２期曲 黎等：纳米金比色法测定多西环素和土霉素１９３
·Ｌ－１．５９，１．７７，４．１３，６．４９，７．３９，８．２６，８．８５ｍａ０，０．→ｈ：ｇ
图１１ 纳米金与土霉素相互作用的紫外－可见吸收光谱图及相应的标准曲线
Ｆｉ．１１ ＵＶ－ＶｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｅｎｃｅｏｆｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ ｇｐｐｐｙｙ
·Ｌ－１多西环素）表１ 常见金属离子、氨基酸及结构类似药物的干扰（５４ｍ０．ｇ］＝０．·Ｌ－１）
Ｔｄｏｘｃｃｌｉｎｅ５４ｍａｂｌｅ１ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｅｘｉｓｔｅｎｔｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎ ｙｙｇｇ［
精密量取１ｍＬ多西环素注射液于棕色容量瓶
中，进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶
－１
测定吸液，分别加入标准溶液０．１２、０．４２ｍｇ·Ｌ，
光度，计算回收率，结果见表２．
测定结果表明所购多西环素方法测定，结果见表３．片剂及注射液含量在标示范围９５．０％～１０５％内，
ＲＳＤ较小，符合药品质量管理规定．
２．７ 含量测定
精密量取多西环素片剂及注射液样品，按实验
）表２ 多西环素片剂及注射液中多西环素的回收率测定（ｎ＝５
）Ｔａｂｌｅ２ Ａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｏｏｓｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｔａｂｌｅｔａｎｄｉｎｅｃｔｉｏｎｓａｍｌｅｓ（ｎ＝５ ｐｐｐｐｙｙｊｐ
Ｓａｍｌｅｓｐｄｏｘｃｃｏｉｎｅｙｙｔａｂｌｅｔｄｏｘｃｃｏｉｎｅｙｙｉｎｅｃｔｉｏｎｊ
／Ｄｏｘｃｃｏｉｎｅａｄｄｅｄ ｙｙ
（·Ｌ－１）ｍｇ
０．０６０．５４０．１２０．４２
／ｏｘｃｃｏｉｎｅｆｏｕｎｄｄ ｙｙ（·Ｌ－１）ｍｇ
０．０５７，０．０５９，０．０６１，０．０６２，０．０６４０．５２１，０．５３２，０．５３５，０．５３９，０．５４８０．１１６，０．１１８，０．１２３，０．１２５，０．１２６０．４１８，０．４１９，０．４２１，０．４２３，０．４２５
ｅｃｏｖｅｒＲｙ
／％
９５．０，９８．３，１０１．７，１０３．３，１０６．７９７．８，９８．２，９９．１，９９．８，１０１．５９８．３，９６．７，１０２．５，１０４．２，１０５．０９９．５，９９．８，１００．２，１００．７，１０１．２
ＳＤＲ／％
４．５１．９３．６０．７
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９４１ 化 学 研 究
）表３ 多西环素片剂及注射液中多西环素的测定（ｎ＝３
）Ｔａｂｌｅ３ Ｒｅｓｕｌｔｓｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｔａｂｌｅｔａｎｄｉｎｅｃｔｉｏｎｓａｍｌｅｓ（ｎ＝３ ｙｙｊｐ
／Ｆｏｕｎｄａｍｏｕｎｔ
／Ｆｏｕｎｄａｍｏｕｎｔ （）ｍｅｒｂｏｔｔｌｅ ｇｐ
９９．２８，１００．７９，１０１．５６
２０１６年
ＲＳＤ
ｏｘｃｃｏｉｎｅｔａｂｌｅｔｄ ｙｙ
（）／％ｍｅｒｔａｂｌｅｔ ｇｐ
１０１．８２，１００．８８，９９．１３４ １．
ａｍｌｅｓＳｐｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｅｃｔｉｏｎ ｙｙｊ
ＲＳＤ／％１．２
３ 结论
采用柠檬酸钠还原氯金酸方法得到纳米金．在弱酸环境中纳米金可与多西环素、土霉素相互作用，产生凝聚，其吸收光谱发生红移，据此测定多西环素、土霉素．优化了缓冲溶液、纳米金用量及反应时间等反应条件；在最佳条件下，测定结果令人满意．同时分析了多西环素片剂及注射液，结果与药典方法结果一致．该方法简单快速，且不需昂贵仪器及大量分析试剂，在食品及环境分析方面前景广泛．参考文献：
，Ｒ：［ＰＲＡＩＯＢＥＲＴＳＭ．Ｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ１］ＣＨＯ ｙ
，ａ，ｍ，ａｎｄｍｏｄｅｏｆａｃｔｉｏｎｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏ ｐｐｇｙ］ｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ．ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＭｏｌｅｉｄｅｍｉｏｌｏ ｐｇｙ ，（）：ＢｉｏｌＲｅｖ２００１，６５２２３２－２６０．
［］，ＸＵ２ＬＵＯＹｌＪＹ，ＬＩＹ，ｅｔａｌ．Ａｎｏｖｅｌｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ
ｃｓｔｒａｍｉｎｅａｔａｓｅｎｓｏｒｕｓｉｎｔａｂｉｌｉｚｅｄｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｓ －－ｙｐｇｇｐ ｃｌｅｓａｓｒｏｂｅｆｏｒｒａｉｄａｎｄｓｅｃｉｆｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｒｔｒａｃ－ ｐｐｐｙ］，ｌｉｎｅｉｎｒａｗ ｍｉｌｋ［Ｊ．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ２０１５，５４：７－１５．ｃ ［］Ｎ３ＩＣＯＬＡＯＵ Ｋ Ｇ，ＣＨＥＮＪＳ，ＥＤＭＯＮＤＳＤＪ．Ｒｅｃｅｎｔ
ｏｃａｎｄｂｉｏｌｏｏｆｎａｔｕｒａｌｌａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｃｈｅｍｉｓｔｒ －ｇｙｙｙ ］，ｃａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ［Ｊ．ＡｎｅｗＣｈｅｍＩｎｔＥｄ２００９，４８ｕｒｒｉｎ ｇｇ （）：４６６０－７１９．
［，Ｌ４］ＳＨＥＮＬ，ＣＨＥＮＪＩＮ，ｅｔａｌ．Ｒａｉｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｐ
ｏｆｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｗｉｔｈｉｎｓｉｔｕｒｏｗｔｈｏｆｓｅｎｓｉｎ ｙｇｇ ］，ｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ．ＡｎａｌＣｈｉｍ Ａｃｔａ２０１４，８３９：８３ ｇｐ－９０．
［］ＷＡＮＧ５ＲＹ，ＦＡＮＳ Ｍ，ＷＡＮＧＲ Ｑ，ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ －
ｉｏｎｏｆａｎｉｎｏｌｃｏｓｉｄｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｂａｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｔ ｇｙｙ ｍｅｔｈｏｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅａｒｅａｔｉｏｎｏｆｏｌｄｎａｎｏａｔｒｉｃｌｅｓ ｇｇｇｇｐ［］，（）：Ｊ．Ｎａｎｏ２０１３，８４３７－４５．
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ｉｖｅａｓｓａａｓｅｄａｔａｓｅｎｓｏｒｆｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｔｂ －ｙｐ，２ｏｆｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅｒｅｓｉｄｕｅｉｎｈｏｎｅＪ］．Ｔｎｌａｎｔａ０１５， ｙｙ［１３１：５６２－５６９．
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Ａｔａｍｅｒａｓｅｄｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｒｏｔｅｉｎｓｕｓｉｎｂ －ｐｐｇａｎｄｕｎａｂｒａｎｃｈｅｄＤＮＡｃａｓｃａｄｅａｍｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅ－ ｐｇｙ ］ｍｏｄｉｆｉｅｄｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ．ＢｉｏｓｅｎｓｏｒｓａｎｄＢｉｏｅｌｅｃ－ ｇｐ，（）：ｒｏｎｉｃｓ２０１６，７８１５２００－２０５．ｔ
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ｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｉｚｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｔ －ｇｐ］ｃｌｅｓｆｒｏｍ ＵＶ－Ｖｉｓｓｅｃｔｒａ［Ｊ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００７，７９： ｐ４２１５－４２２１．
［责任编辑：吴文鹏］
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
０１６年３月２
第２７卷第２期
化 学 研 究ＩＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ＣＨＥＭ
１８９
：／／ｈｔｔｈｘａ．ｃｂｔ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔｐｙｐ
纳米金比色法测定多西环素和土霉素
范淑敏＊曲 黎，魏燕丽，
（）河南科技学院新科学院，河南新乡４５３００３
采用紫外－可见分光光度计、摘 要：采用柠檬酸钠还原法合成粒径约１荧光分光光度计研３ｎｍ的纳米金粒子．究了纳米金粒子与多西环素／土霉素分子的相互作用；通过改变缓冲溶液、纳米金粒子用量、反应时间确定了比色法测定的最优反应条件．结果表明：在弱酸溶液中，多西环素／土霉素分子中的氨基官能团（得到电子－ＮＨ２）成为带电基团（使得纳米金粒子发生聚集，导致纳米金吸收光谱－ＮＨ３＋）并通过静电引力与纳米金粒子结合，发生红移和展宽，颜色由酒红色变成蓝色；在盐酸－柠檬酸钠的缓冲溶液中加入２ｍ反应时间为１Ｌ纳米金，０ｍｉｎ
－１
·Ｌ－１和０．的条件下测得多西环素和土霉素的线性范围分别为０．检出限（分０６～０．６６ｍ５９～８．８５ｍ３σ）ｇｇ·Ｌ，
·Ｌ－１．别为０．可靠，有望应用于食品分析和临床分析等领域．该方法前处理简单、灵敏、００８６、０．０８３８ｍ ｇ关键词：纳米金粒子；比色法；多西环素；土霉素中图分类号：Ｏ６５２．７
文献标志码：Ａ
（）文章编号：１００８－１０１１２０１６０２－０１８９－０６
Ｈｉｈｌｓｅｎｓｉｔｉｖｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｎｄｏｘｃｃｌｉｎｅａｎｄ ｇｙｙｙ
ｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅｂａｓｅｄｏｎｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ ｙｙｇｐ
＊
，ＷＥ，ＱＵＬｉＩＹａｎｌｉＦＡＮＳｈｕｍｉｎ
（ｉｎｋｅｏｌｌｅｅ，ｅｎａｎｎｓｔｉｔｕｔｅｃｉｅｎｃｅｎｄ ｅｃｈｎｏｌｏｉｎｘｉａｎ５３００３，ｅｎａｎ，ｈｉｎａ）ＸＣＨＩｏＳａＴＸＨＣ ｇｇｙ，ｇ４ｆ
）ｗＡｄｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓ（ＧＮＰｓｅｒｅｓｎｔｈｅｓｉｚｅｄｔｈｒｏｕｈｓｏｄｉｕｍｃｉｔｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｗｅｌｌｉｓｅｒｓｅｄ－－ ｇｐｙｇｐｒａｔｅｒｅｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＵＶ－Ｖｉｓｓｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｅｃｔｒｏｈｏｔｏｍｅｔｅｒｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ ｐｐｐ
／ｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｔｈｅｍｕｔｕａｌｅｆｆｅｃｔｂｅｔｗｅｅｎＧＮＰｓａｎｄｄｏｘｃｃｌｉｎｅｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ．Ｔｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｙｙｙｙｐＨ，ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＧＮＰｓ．ａｒａｍｅｔｅｒｓｗｅｒｅｏｔｉｍｉｚｅｄｗｉｔｈｒｅａｒｄｔｏ ｐｐｐｇ
，－ＮＨ３＋），ｒｏｕｈｉｃｈｉｓｏｓｉｔｉｖｅｌｃｈａｒｅｄｉｎｗｅａｋｌａｃｉｄｉｃｍｅｄｉｕｍ（ｎａｍｅｌＴｈｅａｍｉｎｏ ｇｐ，ｗｐｙｇｙｙ ｎｔｅｒａｔｅｓｗｉｔｈｔｈｅｎｅａｔｉｖｅｃｈａｒｅｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆｏｌｄｎａｎｏａｒｔｉｃｌｅｓｔｏｆｏｒｍａｂｉｅｒｂｉｎｄｉｎｉ ｇｇｇｇｐｇｇｇ
，ｕｔｒｅｓｕｌｔｉｎｔｈｅａｒｅａｔｉｏｎｏｆＧＮＰｓｗｉｔｈａｒｅｄｏｒｌｅｒｏｄｕｃｔｔｈｒｏｕｈｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｂｉｎｄｉｎ－－ｐ－ ｐｇｇｇｇｇｇｐ ｔｂｏｌｕｅｃｏｌｏｒｃｈａｎｅ．ＴｈｅａｂｓｏｒｔｉｏｎｂａｎｄｏｆＧＮＰｓｈａｄａｒｅｄｓｈｉｆｔａｎｄｂｒｏａｄｅｎｅｄ．Ｕｎｄｅｒｏｔｉ－－ ｇｐｐ
·，ｍａｌｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｅｓｏｆｔｈｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｓｅｎｓｏｒｗｅｒｅ０．０６－０．６６ｍ ｐｇｇ
－１
ａｏＬ－１ｎｄ０．５９－８．８５ｍｉｔｈｔｈｅｃｏｒｒｅｓｏｎｄｉｎｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（３ｆ０．００８６ａｎｄσ） ｇ·Ｌ ｗｐｇ
－１
０．０８３８ｍｏｒｄｏｘｃｃｌｉｎｅａｎｄｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅｒｅｓｅｃｔｉｖｅｌ．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｒｏｍｉｓｉｎ ｇ·Ｌｆｙｙｙｙｐｙｐｇ
，，ｃｏｓｔ．ｆｏｒｆｏｏｄｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｎａｌｓｉｓｏｗｉｎｔｏｔｏｉｔｓｓｉｍｌｅｒｅｌｉａｂｌｅｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔａｎｄｌｏｗ－ ｙｇｐ
：；；；ＫｅｗｏｒｄｓＧＮＰｓｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｄｏｘｃｃｌｉｎｅｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ ｙｙｙｙｙ）是含有ｅｔｒａｃｃｌｉｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｔ 四环素类抗生素（ ｙ
］１－３
土霉素和多并四苯基本骨架的一类广谱抗生素［．西环素都可以促进畜禽的生长，预防和治疗畜禽、鱼
收稿日期：０１６－０１－２２．２
）基金项目：国家自然科学基金（５１３０４０６４．
，女，讲师，作者简介：曲 黎（研究方向分析化学．通讯联９８１－）１
"
类的疾病，并可以增加产奶量．过量使用土霉素和多西环素造成动物产品中药物残留，影响人体健康，因此对动物源性食品中土霉素和多西环素的最高残留，
］４－６
目前，各个国家都有相应的标准及检测方法［我．
国对于土霉素和多西环素的测定，常用的方法有高效
］７
、）、电化学分析紫外分光光度法［液相色谱法（ＰＬＣＨ］］］０１－１２３８－１１１
、荧光法［和细菌抑制法［等．法［
：系人，Ｅ－ｍａｉｌｆｓｍｈｎｌｉｕｎ．ｃｏｍ．＠ａｙ
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９０１ 化 学 研 究２０１６年
纳米金比色法灵敏度高，简单、快速，是目前研究比较热门的分析测定方法．纳米金比色分析的主要优势是通过肉眼即可观察其颜色变化，简单快速，而且省去昂贵复杂的仪器，另外纳米金的消光系数高，灵金属离子敏度高，因而比色分析被用于蛋白质，ＮＡ，Ｄ和小分子等多种物质的检测，同时被用于蛋白质之
［４－１］６
目前，纳米金比间、．ＮＡ之间的相互作用研究１Ｄ］１７
色法已成功用于三聚氰胺、瘦肉精等物质的检测［．
道一致．球形纳米金粒子存在表面等离子吸收的特征峰，以水为空白，绘制纳米金吸收曲线，如图１所示，在５据此可计算纳米金的１８ｎｍ处有最大吸收，
［８］
由纳米金的紫外可见吸收光粒径，约为１．３ｎｍ１
谱图可以看出纳米金颗粒稳定，符合分析要求．
本文采用纳米金比色法测定土霉素和多西环素，测定结果与药典分析结果一致．此方法简单，测定速度快，而且不需要昂贵的仪器及大量的分析试剂，在食品分析及环境监测方面有很好的应用前景．
１ 实验部分
１．１ 仪器与试剂
上海仪电科学仪器有限公３ＨＳＣ酸度计（Ｐ－；司）日本岛津公３０１０紫外－可见分光光度计（Ｕ－；；司）日本日立）７０００荧光分光光度计（Ａ１２０４ＢＦＦ－；电子分析天平（上海佑科仪器有限公司）２恒温ＬＣ－；加热磁力搅拌器（郑州长城科工贸有限公司）ｅｃＴ－日本）ｎｔａｉＧ２２０ｓｗｉｎ高分辨型透射电子显微镜（．－
；多西环素，土四氯金酸（ｉｍａｌｄｒｉｃｈ公司）Ｓ－Ａｇ；盐酸－乙酸霉素对照品（中国药品生物制品检定所）钠缓冲溶液、盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液；多西环素片，），国药准字Ｈ和注射液（国剂（１ｇ１３０２１９４５１ｇ０．０．
）药准字Ｈ为药店随机购买；二次蒸馏水、２００６０４０５超纯水由实验室提供，所用试剂均为分析纯．２ 纳米金的合成５１．
用新配制的王水浸泡所用玻璃器皿２超纯４ｈ，精确量水洗后烘干备用．将氯金酸配成１％的溶液，将取１ｍＬ于１００ｍＬ棕色容量瓶中稀释至０．０１％．０．０１％的氯金酸溶液搅拌加热至沸后加入２．７５ｍＬ
２ｍｉｎ后颜色由紫红色变为１％的柠檬酸钠溶液，１酒红色，冷却至室温，用０．滤液于２μｍ超滤膜过滤，棕色试剂瓶中４℃保存备用．
３ 测定吸光度１．
取２．加入５ｍＬ新制纳米金于５ｍＬ容量瓶中，盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液，定容．取２ｍＬ纳米金，依
次加入不同体积的多西环素标准溶液（５０×１０－４１．ｇ ·ｍＬ－１）·ｍＬ－１）／土霉素标准溶液（，４８×１０－３１．ｇ
［］
图１ 纳米金的紫外－可见吸收光谱Ｆｉ．１ ＡｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ
ｇｐｐ
如图２所示，制ＥＭ）Ｔ 纳米金的透射电镜分析（
备的纳米金为球形，粒径均匀，分散良好．
图２ 纳米金的透射电镜图Ｆｉ．２ ＳＥＭｏｆＧＮＰｓ ｇ
２．２ 多西环素／土霉素测定原理
实验利用柠檬酸钠还原氯金酸制备纳米金，纳米金粒子表面包裹大量的柠檬酸根离子，由于静电排斥力纳米金不发生凝聚．在弱酸溶液中，多西环可以得到素／土霉素分子中的氨基官能团（－ＮＨ２），和纳米金粒子之间通过静电引力电子（－ＮＨ３＋）相互作用，引发纳米金凝聚．凝聚后的纳米金透射电镜图如图３所示，纳米金凝聚在一起，证明了纳米金粒子与四环素类抗生素之间的相互作用．凝聚后纳米金颜色由酒红色变为紫色最终变为蓝色，由于纳米金表面等离子共振，其吸收光谱发生红移和展宽，紫外－可见吸收光谱如图４，纳米金的最大吸收纳米金的共振峰由原来的５１８ｎｍ红移至６４０ｎｍ．散射光谱如图５所示，纳米金凝聚后，共振散射光谱
混合均匀，以水为参比分别测定吸光度．
２ 结果与讨论
２．１ 纳米金表征
纳米金呈酒红色，其表观颜色及粒径与文献报
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
第２期曲 黎等：纳米金比色法测定多西环素和土霉素１９１
增强．并且在一定范围内纳米金的聚集与
多西环素／土霉素的浓度呈现良好的线性关系，据此可建立简单、快速测定多西环素／土霉素的比色分析．
范围考查缓冲溶液对测定的影响．图６显示不同缓冲溶液对测定的影响，结果表明使用盐酸－柠檬酸钠缓冲溶液的测定效果较好．图７显示缓冲溶液加入量对测定的影响，００μＬＨ为２．１的盐酸－柠檬酸钠缓冲７ ｐ
／值最大．其原因溶液引起纳米金凝聚的Δ（Ａ６Ａ５４０１８）是ｐ纳米金粒子表面所带负电荷较少，不
Ｈ过低时，利于结合多西环素
，而ｐＨ过高，多西环素中质子化的氢解离，使正电荷减少，也不利于结合．
·Ｌ－１多西环素０．５４ｍｇ
图３ 凝聚后的纳米金透射电镜图
Ｆｉ．３ ＳＥＭｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅ
ｇｐｙｙ
·Ｌ－１多西环素（））不存在多西环素（存在０．５４ｍａｂｇ
图４ 纳米金的紫外－可见吸收光谱图Ｆｉ．４ ＵＶ－Ｖｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓ
ｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ ｇｐｐ
／图６ 缓冲溶液对Δ（的影响Ａ６Ａ５４０１８）
ｉ．６ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｃｉｄｉｔｏｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅＦ ｙｙｇｙ
ｕｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｕ
ｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎｓｂ ｇｙ
（））·Ｌ－１多西环素不存在多西环素（存在０．ａｂ４８ｍｇ
图５ 纳米金的共振散射光谱图Ｆｉ．５ ＲＲＳｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓ ｇｐ
／图７ 盐酸－柠檬酸钠加入量对Δ（的影响Ａ６Ａ５４０１８）ｓＦｉ．７ｆｆｅｃｔｏｆａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＨＣｌｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ－ Ｅ ｇ
２．３ 实验条件优化
将多西环素加入纳米金后，纳米金产生凝聚，其／来表示．凝聚程度可用Δ（在ｐＡ６Ａ５２．０～７．０Ｈ４０１８）
同时我们也考察了纳米金的用量对体系测定的
不同纳米金影响．改变纳米金的用量从１～３ｍＬ，
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９２１ 化 学 研 究２０１６年
／用量对应的Δ（值如图８所示，纳米金的Ａ６Ａ５４０１８）浓度增大时，其最大吸收峰值降低，当纳米金浓度高时，对仪器的染色比较严重，且对低浓度的多西环素变化不灵敏，当纳米金浓度低时，颜色变化不灵敏，
因此实验选择２ｍＬ纳米金．
图９考察了反应时间对测定的影响，连续测定结果表明：加入多西环素，０ｍｉｎ凝
聚程度最１ｈ，１
大，反应时间设为１０ｍｉｎ后基本不再变化，０ｍｉｎ．１
／图８ 不同纳米金用量对应的Δ（Ａ６Ａ５４０１８）／ｉ．８ ＥｆｆｅｃｔｏｆａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＧ
ＮＰｓｏｎΔ（Ａ６Ａ５Ｆ ｇ４０１８）
图９ 反应时间对吸收光谱的影响
／Ｆｉ．９ ＥｆｆｅｃｔｏｆｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｎΔ（Ａ６Ａ５ ｇ４０１８）
２．４ 多西环素／土霉素的测定
在最优条件下，按照实验方法依次加入多西环／，由Δ（素标准溶液并测定其吸收光谱（图１Ａ６０）４０
，对多西环素的浓度作图（线性如图１Ａ５０所示）１８）
－１
线性回归方程为Δ范围为０．０６～０．６６ｍｇ·Ｌ，
／（多西环素，Ａ６Ａ５ｃ（＝０．０４２＋１．４８０４ｍ ｇ·４０１８）
·Ｌ－１，纳米金比色法测定多西环素具有检出限低，
灵敏度高，方法简单等优点，有望应用于食品分析领域．
最优条件下测定土霉素，测定其吸收光谱（图）·Ｌ－１范围内，，在线性回归方程为１．５９８．８５ｍ０１～ｇ
／，·Ｌ－１）土霉素，Ａ６Ａ５ｃ（＝０．２２２＋０．０７７ｍΔ（ｇ３０１８）
，·Ｌ－１检出限
（相关系数．０．９９９．０８３８ｍ０３σ） ｇ
，为０．检出限（相关系数为０．９９８，００８６ｍ３Ｌ－１）σ） ｇ
：·Ｌ－１．ａ０，０．０６，０．１２，０．３，０．４２，０．５４，０．６６ｍ→ｇｇ
图１０ 不同浓度多西环素存在下纳米金的紫外－可见吸收光谱图及相应的标准曲线ｉ．１０ ＵＶ－ＶｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｅｎｃｅｏｆｄｏｘｃｃｌｉｎｅＦ ｇｐｐｐｙｙ
２．５ 常见物质的干扰
表１考察了金属离子、氨基酸及结构类似药物·Ｌ－１多西环素，的干扰．结果表明，对于０．该５４ｍｇ体系基本不受干扰，有较好选择性．
６ 回收率２．
研细，精密称取约一片多西取多西环素２０片，
环素质量，盐酸溶解后过滤，移至容量瓶，定容．进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶液，分别
－１
测定吸光度，加入标准溶液０．计０６、０．５４ｍｇ·Ｌ，
算回收率，实验重复３次．
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
第
２期曲 黎等：纳米金比色法测定多西环素和土霉素１９３
·Ｌ－１．５９，１．７７，４．１３，６．４９，７．３９，８．２６，８．８５ｍａ０，０．→ｈ：ｇ
图１１ 纳米金与土霉素相互作用的紫外－可见吸收光谱图及相应的标准曲线
Ｆｉ．１１ ＵＶ－ＶｉｓａｂｓｏｒｔｉｏｎｓｅｃｔｒａｏｆＧＮＰｓｉｎｔｈｅａｂｓｅｎｃｅａｎｄｒｅｓｅｎｃｅｏｆｏｘｔｅｔｒａｃｃｌｉｎｅ ｇｐｐｐｙｙ
·Ｌ－１多西环素）表１ 常见金属离子、氨基酸及结构类似药物的干扰（５４ｍ０．ｇ］＝０．·Ｌ－１）
Ｔｄｏｘｃｃｌｉｎｅ５４ｍａｂｌｅ１ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｅｘｉｓｔｅｎｔｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ（ｃｏｎｔａｉｎｉｎ ｙｙｇｇ［
精密量取１ｍＬ多西环素注射液于棕色容量瓶
中，进行标准加入回收实验，精密量取适量样品溶
－１
测定吸液，分别加入标准溶液０．１２、０．４２ｍｇ·Ｌ，
光度，计算回收率，结果见表２．
测定结果表明所购多西环素方法测定，结果见表３．片剂及注射液含量在标示范围９５．０％～１０５％内，
ＲＳＤ较小，符合药品质量管理规定．
２．７ 含量测定
精密量取多西环素片剂及注射液样品，按实验
）表２ 多西环素片剂及注射液中多西环素的回收率测定（ｎ＝５
）Ｔａｂｌｅ２ Ａｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｏｏｓｅｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｔａｂｌｅｔａｎｄｉｎｅｃｔｉｏｎｓａｍｌｅｓ（ｎ＝５ ｐｐｐｐｙｙｊｐ
Ｓａｍｌｅｓｐｄｏｘｃｃｏｉｎｅｙｙｔａｂｌｅｔｄｏｘｃｃｏｉｎｅｙｙｉｎｅｃｔｉｏｎｊ
／Ｄｏｘｃｃｏｉｎｅａｄｄｅｄ ｙｙ
（·Ｌ－１）ｍｇ
０．０６０．５４０．１２０．４２
／ｏｘｃｃｏｉｎｅｆｏｕｎｄｄ ｙｙ（·Ｌ－１）ｍｇ
０．０５７，０．０５９，０．０６１，０．０６２，０．０６４０．５２１，０．５３２，０．５３５，０．５３９，０．５４８０．１１６，０．１１８，０．１２３，０．１２５，０．１２６０．４１８，０．４１９，０．４２１，０．４２３，０．４２５
ｅｃｏｖｅｒＲｙ
／％
９５．０，９８．３，１０１．７，１０３．３，１０６．７９７．８，９８．２，９９．１，９９．８，１０１．５９８．３，９６．７，１０２．５，１０４．２，１０５．０９９．５，９９．８，１００．２，１００．７，１０１．２
ＳＤＲ／％
４．５１．９３．６０．７
：／（）：ＯＩ１０．１４００２．ｈｘａ．２０１６．０２．００９２０１６，２７２１８９－１９４Ｄ｜化学研究，ｊｙ
９４１ 化 学 研 究
）表３ 多西环素片剂及注射液中多西环素的测定（ｎ＝３
）Ｔａｂｌｅ３ Ｒｅｓｕｌｔｓｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｔａｂｌｅｔａｎｄｉｎｅｃｔｉｏｎｓａｍｌｅｓ（ｎ＝３ ｙｙｊｐ
／Ｆｏｕｎｄａｍｏｕｎｔ
／Ｆｏｕｎｄａｍｏｕｎｔ （）ｍｅｒｂｏｔｔｌｅ ｇｐ
９９．２８，１００．７９，１０１．５６
２０１６年
ＲＳＤ
ｏｘｃｃｏｉｎｅｔａｂｌｅｔｄ ｙｙ
（）／％ｍｅｒｔａｂｌｅｔ ｇｐ
１０１．８２，１００．８８，９９．１３４ １．
ａｍｌｅｓＳｐｄｏｘｃｃｏｉｎｅｉｎｅｃｔｉｏｎ ｙｙｊ
ＲＳＤ／％１．２
３ 结论
采用柠檬酸钠还原氯金酸方法得到纳米金．在弱酸环境中纳米金可与多西环素、土霉素相互作用，产生凝聚，其吸收光谱发生红移，据此测定多西环素、土霉素．优化了缓冲溶液、纳米金用量及反应时间等反应条件；在最佳条件下，测定结果令人满意．同时分析了多西环素片剂及注射液，结果与药典方法结果一致．该方法简单快速，且不需昂贵仪器及大量分析试剂，在食品及环境分析方面前景广泛．参考文献：
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［责任编辑：吴文鹏］
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