工具酶的种类和用途

基因工程涉及众多的工具酶可粗略的分为限制酶，连接酶，聚合酶，核酸酶和修饰酶五大类

DNA限制性内切酶

主要用途：DNA基因组物理图谱的组建；基因的定位和基因分离；DNA分子碱基序列分析；比较相关的DNA分子

连接酶： T4DNA连接酶 T4噬菌体RNA连接酶大肠埃希菌DNA连接主要用途:1 催化两个具有黏性末端或平末端的DNA片段形成磷酸二酯键，形成新的重组DNA分子；2 接合由复制叉上不连续复制链上产生的缺口；3 缝合DNA损伤修复、遗传重组及DNA链剪接中缺口。

聚合酶： DNA聚合酶 RNA聚合酶逆转录酶大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ 。Klenow片段

主要用途：催化以DNA或RNA为模板合成DNA的反应，把脱氧核糖核苷酸连续地添加到双链DNA分子或引物链的3´-OH末端，催化核苷酸的聚合作用。

核酸酶：DNase、RNase、核酸酶S1

主要用途：末端转移酶在Mg2+存在下，选择3′－OH端单链DNA为引物加成核苷酸，在Co2+存在下，选择3′－OH

端双链DNA为引物加成核苷酸，形成多聚核苷酸尾。常用于核酸末端标记和核酸连接的互补多聚尾（连接器）。修饰酶

主要在用途：碱性磷酸酶去除5′－P，可防止二分子DNA片段5′端P基团自身空间障碍，影响DNA分子之间的连接，一般用碱性磷酸酶处理载体DNA除去5′端P基团，在连接酶作用下目的基因的5′端P先与载体3′端OH连接，再通过复制修复另一条链，使二条链完全连接。该方法大大提高了连接效率。

姚凌愿

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生物制药1201