实验九 酵母核糖核酸的提取及测定
植物117 左宜平 1101080709
一．实验背景
二．实验目的
了解从酵母中提取RNA的方法并掌握其测定手段。
三．实验原理
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA，DNA含量很少，菌体容易收集，RNA也易于分离。此外，抽提后的蛋白质还具有很高的利用价值。
RNA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将pH调到2.0-2.5使RNA沉淀，进行离心收集
工业上常用的提取RNA的方法主要有稀碱法和浓盐法，前者利用碱使细菌细胞壁溶解，使RNA释放出来，这种方法抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解；后者是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，此方法易掌握，产品颜色较好，用浓盐法提取RNA时应注意掌握温度，避免在20~70摄氏度之间的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率，利用加热，至90~100摄氏度使蛋白质变性，破坏该类酶，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态的RNA，可采用苯酚法或氯仿——异戊醇法除去蛋白，然后乙醇沉淀RNA，离心收集。
本实验采用浓盐法（10%NaCl）
核酸不论是DNA还是RNA，都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物。而核苷酸是由磷酸，碱基和核糖构成的。
因为核酸分子中的碱基核糖和磷酸是以等分子比例存在的，所以要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量，只需测定组成核酸的一种成分，如磷酸，糖或碱基，便可计算出核酸的含量。
目前测定核酸含量的方法有：
1.定磷法，测定RNA和DNA
2.戊糖测定法，测RNA
3.脱氧戊糖测定法，测DNA
4.紫外吸收法，测DNA和RNA
5.微生物测定法，测DNA
6.应用同位素研究的方法，测定DNA和RNA
其中方法5.，6为一些特殊研究之用，应用面较窄，方法1,2,3,4为较普遍的核酸测定手段。
定磷比色法是有准确，微量，快速的特点
四．实验材料，仪器和试剂
五．实验步骤
六．数据整理及结果计算
七．思考题
1.本实验在紫外法测定RNA含量时，为什么要固定测定液的pH值，若pH值不同，会影响测定结果吗？为什么？
用紫外法测定RNA含量的原理之一是嘌呤和嘧啶环具有共轭双键，使核酸在260nm处有最大吸收峰值，如果溶液的pH不固定，使紫外吸收值也不同，测得的浓度不准确。
2.在测定中，加钼酸铵——过氯酸沉淀剂的作用是什么？离心出去沉淀后，其上清液为什么要喜事100倍？
加沉淀剂是为了使RNA沉淀，以获得除去RNA之外其他所有试剂的待测液，作为空白对照标定来测定RNA含量。
实验依据朗伯比尔定律A=εbc，其中ε和b都已确定，而且A的数值在0.2~0.8之间误差最小，结果最为可靠，因此需要稀释溶液使A在该范围内。
3.物质分离纯化的总体策略是什么？而分离纯化生命大分子是否有特别要注意的事项？为什么？
实验九 酵母核糖核酸的提取及测定
植物117 左宜平 1101080709
一．实验背景
二．实验目的
了解从酵母中提取RNA的方法并掌握其测定手段。
三．实验原理
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中以酵母最为理想，因为酵母核酸中主要是RNA，DNA含量很少，菌体容易收集，RNA也易于分离。此外，抽提后的蛋白质还具有很高的利用价值。
RNA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋白质分离，然后将菌体除去，再根据核酸在等电点溶解度最小的性质，将pH调到2.0-2.5使RNA沉淀，进行离心收集
工业上常用的提取RNA的方法主要有稀碱法和浓盐法，前者利用碱使细菌细胞壁溶解，使RNA释放出来，这种方法抽提时间短，但RNA在此条件下不稳定，容易分解；后者是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，此方法易掌握，产品颜色较好，用浓盐法提取RNA时应注意掌握温度，避免在20~70摄氏度之间的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率，利用加热，至90~100摄氏度使蛋白质变性，破坏该类酶，有利于RNA的提取。
若要提取接近天然状态的RNA，可采用苯酚法或氯仿——异戊醇法除去蛋白，然后乙醇沉淀RNA，离心收集。
本实验采用浓盐法（10%NaCl）
核酸不论是DNA还是RNA，都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物。而核苷酸是由磷酸，碱基和核糖构成的。
因为核酸分子中的碱基核糖和磷酸是以等分子比例存在的，所以要测定生物体内核酸的含量或者测定提取出来的核酸含量，只需测定组成核酸的一种成分，如磷酸，糖或碱基，便可计算出核酸的含量。
目前测定核酸含量的方法有：
1.定磷法，测定RNA和DNA
2.戊糖测定法，测RNA
3.脱氧戊糖测定法，测DNA
4.紫外吸收法，测DNA和RNA
5.微生物测定法，测DNA
6.应用同位素研究的方法，测定DNA和RNA
其中方法5.，6为一些特殊研究之用，应用面较窄，方法1,2,3,4为较普遍的核酸测定手段。
定磷比色法是有准确，微量，快速的特点
四．实验材料，仪器和试剂
五．实验步骤
六．数据整理及结果计算
七．思考题
1.本实验在紫外法测定RNA含量时，为什么要固定测定液的pH值，若pH值不同，会影响测定结果吗？为什么？
用紫外法测定RNA含量的原理之一是嘌呤和嘧啶环具有共轭双键，使核酸在260nm处有最大吸收峰值，如果溶液的pH不固定，使紫外吸收值也不同，测得的浓度不准确。
2.在测定中，加钼酸铵——过氯酸沉淀剂的作用是什么？离心出去沉淀后，其上清液为什么要喜事100倍？
加沉淀剂是为了使RNA沉淀，以获得除去RNA之外其他所有试剂的待测液，作为空白对照标定来测定RNA含量。
实验依据朗伯比尔定律A=εbc，其中ε和b都已确定，而且A的数值在0.2~0.8之间误差最小，结果最为可靠，因此需要稀释溶液使A在该范围内。
3.物质分离纯化的总体策略是什么？而分离纯化生命大分子是否有特别要注意的事项？为什么？