红松树皮中原花青素提取工艺研究

天然产物研究与开发N at Prod R es Dev 2010, 22:339 342, 325

文章编号:1001 6880(2010) 02 0339 04

红松树皮中原花青素提取工艺研究

宋应华, 陶 冶, 罗小武

1

*21

重庆工商大学环境与生物工程学院, 重庆400067; 2煤炭科学研究总院重庆研究院, 重庆400037

摘 要:采用溶剂回流提取的方法, 以红松树皮中原花青素的提取率为考察指标, 考察了提取溶剂种类、溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间、提取次数等因素对原花青素提取效果的影响。通过正交实验, 确定红松树皮中原花青素的最佳提取工艺条件为:提取溶剂60%乙醇, 提取温度50 , 料液比1:7, 提取时间60m i n 。关键词:红松; 原花青素; 提取中图分类号:R 284. 2; T S202. 3

文献标识码:A

Extracti ng Process of Proanthocyani di ns fro m P i nus koraiensis Bark

SONG Y ing hua , TAO Y e , L UO X i a o wu

1

1*21

Institute of Environ m ental and B iology Engineer i ng, Chongq i ng T echnology and Business Universit y, Chongqing 400067, China; 2Chongqing Research Instit u te of Chi nese Coal R esearch Institute , Chongqing 400037, China

Abstract :T he so lvent refl ux ex tracti on process for proanthocyanidi ns from P i nus koraiens is Bark was opti m i zed by o r thogona l desi gn w ith L 9(34) mode. l The ex tracti on yie l d o f proan t hocyan i d i nsw as regarded as the i ndex of exa m i nati on . T he i nfl uence of the extraction so lvent concentrati on , te m pe ra t ure , soli d liqu i d ra tio and ex trac ti ng ti m e w ere i nvestigated here i n . O pti m u m extraction conditi onsw ere deter m i ned as f o ll ow s :ex tracti ng so lvent w as 60%ethano, l ex tracti ng te m pe r at ure w as 50 , so li d liquid ra ti o w as 1 7, ex tracti ng ti m e w as 60m i n and ex tracti ng thr i ce . K ey word s :P i nu s koraiensis ; proanthocyan i d i ns ; ex tract

原花青素(PC ) 是广泛存在于植物界中的聚多酚类物质, 分布于植物的叶、花、果、皮内。松树[7 9]皮提取物的主要成分是水溶性极高的PC 低聚物(OPC ), 同时还含有多种对人体有用的生物活性成分, 具有显著的清除自由基、抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、防辐射及抗突变等多种生理功效, 具有良好的开发前景。本文以我国浙江地区引进种植的美国红松树皮为原料, 采用溶剂回流提取法, 对红松树皮中所含PC 进行提取。在单因素试验的基础上, 采用正交试验方案, 以PC 提取率为参考指标, 对红松树皮PC 的溶剂回流提取工艺进行优选, 得出了红松树皮PC 溶剂回流提取工艺的最佳参数组合。

[1 6]

限公司友情提供。

试剂:PC 标准品, 成都曼思特生物科技有限公司; 甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、盐酸硫酸铁铵, 均为分析纯。

主要仪器:9FZ 35A 型多用植物粉碎机, 四川国营简阳机械厂; UV1102型紫外/可见分光光度计, 上海天美科学仪器有限公司; PL203型电子天平, 瑞士梅特勒 托利多公司; HH 型恒温水浴, 江苏金坛市中大仪器厂。1. 2 实验方法

1. 2. 1 松树皮中PC 的提取方法

准确称取粉碎后的松树皮10g 于250mL 圆底烧瓶中, 在一定料液比、溶剂浓度和温度条件下热回流提取一定时间, 取出过滤, 减压浓缩, 将浓缩液定容, 测定溶液中PC 含量。分别对溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间进行单因素试验。在单因素试验的基础上, 以溶剂浓度、提取温度、时间、料液比设计L 9(3) 正交试验(见表1), 探讨最佳提取工艺。为了提高试验精度, 每号试验均重复两次。

4

1 材料与方法

1. 1 材料及仪器

原料:美国红松树皮由湖州恩贝希生物原料有

收稿日期:2009 09 02 接受日期:2009 10 27

基金项目:重庆市科委自然科学基金计划资助项目(CSTC,

2009BB7374); 重庆工商大学青年科研基金项目(0752004)

*通讯作者Te:l 023 62769785; E m ai:l yh s w j yh s @126. com

340

表1 正交实验的因素和水平

天然产物研究与开发 Vol 22

剂, 结果见图1。

T ab l e 1 Fac t o rs and l eve l s of the o rt hogona l experi m ent

因素

水平

A 料液比

(g /mL ) 1 51 71 9

B 乙醇浓度(%)

607080

C 提取温度D 提取时间

( ) (m i n )

405060

405060

123

本文以所提取PC 的质量分数表示提取率, 即

每100g 松树皮中经提取得到的PC 量。1. 2. 2 PC 含量的测定! ! ! 正丁醇 盐酸法

[10]

图1 不同提取溶剂对提取效果的影响

F ig 1 Effect o f extracting so l vents on the y i e l d of proan

thocyani d i ns

1. 2. 2. 1 标准曲线的绘制

精确称取一定质量PC 标准品, 用无水乙醇溶解并定容, 将其稀释成不同浓度, 分别取1mL 不同浓度的PC 标准品溶液于25mL 具塞试管中, 分别加入6mL 正丁醇 浓盐酸(v /v=95 5) 和0. 2m L 2%盐酸 硫酸铁铵溶液, 摇匀后, 于95 水浴中加热40m in , 然后用自来水迅速冷却至室温。以空白为对照, 用紫外分光光度计在550nm 处测出其吸光度值, 所取标准溶液的浓度和吸光度数据经回归处理, 回归方程A bs =0. 0028c +0. 0155, R =0 9931。结果表明, PC 在22~110ug /mL范围内具良好的线性关系。1. 2. 2. 2 PC 含量测定

取1mL 粗提物样液进行稀释, 定容。取上述溶液1mL 于具塞试管中, 分别加入6mL 正丁醇 浓盐酸(v /v=95:5) 和0. 2mL2%盐酸 硫酸铁铵溶液, 摇匀后, 于95 水浴中加热40m i n , 然后用自来水迅速冷却至室温。以1mL 乙醇代替提取液重复上述操作, 作为参比液, 用紫外分光光度计在550nm 处测出其吸光度值, 并根据回归方程计算待测液中的PC 含量, 从而根据式(1) 计算出PC 提取率。

∀m ∀v 1000

y(%) =

w ∀1000

(1)

2

由图1可知, 采用蒸馏水提取的效果较差, 而乙醇的效果最好。由于丙酮、乙酸乙酯等均有一定毒性, 若去除不完全会对人体造成伤害, 而水的提取效果太差, 从安全、经济的角度考虑, 本实验选择乙醇作为松树皮PC 的最佳提取溶剂。2. 2 单因素实验

考察了提取溶剂浓度、提取温度、固液比和提取时间等因素对PC 提取率的影响, 以确定较佳工艺条件, 结果如图2~5所示。

图2 乙醇浓度对提取效果的影响

F i g 2

E ffect of ethano l concen trati on on t he y i e l d o f proan t hocyan i d i ns

由图2可见, 随着乙醇浓度增加, PC 提取率增大。当乙醇浓度为70%时, PC 提取率最高, 如继续增大乙醇浓度, 则可能会使一些醇溶性杂质和亲脂性较强成分溶出增加, 导致PC 提取率有所下降, 同时, 乙醇浓度过高, 还会增加后续减压浓缩回流操作时间, 增加原料和操作成本, 因此, 以70%乙醇对PC 进行提取较为适宜。

由图3可见, 随着温度的升高, PC 的提取率呈先上升后下降的趋势, 当温度为50 时, PC 的提取率最高, 如温度进一步升高, 则将破坏活性成分, 使PC 的提取率下降。因此, 确定50 为松树皮PC 提式中, c 为由回归方程计算得到的浓度, ug /mL;m 为稀释倍数; v 为待测液体积, m L ; w 为称取松树皮质量, g 。

2 结果与讨论

2. 1 提取溶剂的确定

在热回流提取条件下, 选用相同浓度的乙醇、乙

,

Vol 22 宋应华等:红松树皮中原花青素提取工艺研究

341

PC 提取率也会相应地增加, 当料液比为1:7(g /mL)时, 如溶剂用量继续增加, 则PC 的提取率增加并不明显。考虑到溶剂消耗, 选用1:7

为适宜料液比。

图5 提取时间对提取效果的影响

F i g 5 E ffec t of extracti ng ti m e on the y ie l d o f proan t hocy a

nidi ns

由图5可以看出, 随着提取时间的延长, PC 提取率也不断增大, 当提取时间超过50m i n 后, 松树皮内外组分浓度逐渐趋于平衡, PC 提取率增加得并不明显, 同时, 提取时间的延长还会导致其受热时间过长而变性, 故选取50m in 为最佳提取时间。2. 3 正交实验

按1. 2. 1所述L 9(3) 正交实验设计因素水平

由图4可以看出, 随着提取溶剂用量的增加,

安排, 考察松树皮中原花素的提取效果。试验结果及分析见表2和表3。

4

表2 正交实验方案及结果

T able 2 T he project and resu lt of t he orthogona l experi m ent

试验号

No .

123456789

K 1K 2K 3K 1K 2K 3

A

料液比Soli d li qu i d rati o(g/mL)1:5(1) 1:5(1) 1:5(1) 1:7(2) 1:7(2) 1:7(2) 1:9(3) 1:9(3) 1:9(3)

39. 3351. 9051. 196. 568. 658. 53

B

乙醇浓度E t hano l con centrati on (%)

60(1) 70(2) 80(3) 60(1) 70(2) 80(3) 60(1) 70(2) 80(3)

49. 4845. 7047. 248. 257. 627. 87

C

提取温度Extracti on te m perat u re( )

40(1) 50(2) 60(3) 50(2) 60(3) 40(1) 60(3) 40(1) 50(2)

45. 4850. 5646. 387. 588. 437. 73

D

提取时间Estraction ti m e(mi n) 40(1) 50(2) 60(3) 60(3) 40(1) 50(2) 50(2) 60(3) 40(1) 46. 3246. 5849. 527. 727. 768. 25

提取率Extracti on y i eld(mg /g, %) 重复I 6. 336. 676. 659. 797. 797. 888. 548. 488. 75

重复II 6. 406. 586. 709. 898. 178. 388. 538. 018. 88

合计12. 7313. 2513. 3519. 6815. 9616. 2617. 0716. 4917. 63

342

R K 2+K 2+K 2123K 2+K 2+K 2123

3∀2

22K 21+K 2+K 3S j =-CT

天然产物研究与开发 Vol 22

2. 096860. 881143. 48

0. 636768. 381128. 06

0. 856775. 851129. 31

0. 536767. 471127. 91

G = yi =142. 42

2

CT =G /(9∀2) =1126. 86

16. 621. 202. 451. 05

优水平

A 2B 1C 2D 3

表3 方差分析表T ab l e 3 The ana l y si s of var iance

方差来源

S ource

A B C D 误差

偏差平方和

S 16. 621. 202. 451. 050. 33

05(

3 结论

F 比F

显著性S i g

自由度 22229

均方M S 8. 310. 601. 230. 530. 037

01

通过单因素和正交实验设计, 考虑各因素对PC 提取效果的影响, 红松树皮中PC 提取的最佳工艺条件为:提取溶剂60%乙醇, 提取温度50 , 料液比1 7, 提取时间60m i n , 提取3次。

参考文献

1 Le Bourvell ec , P i cot C , R enard M, et al . S ize exc l usi on chro

225. 59***16. 22

**

33. 24***14. 32

**

F 0, 9) =3. 01F 0. 10(2.

(2, 9) =16. 39

2, 9) =4. 26F 0. (2, 9) =8. 02F 0. 001

m atography of procyan i d i ns :co m par ison bet w een app l e and g rape procyan i dins and app licati on t o t he characteriza ti on of fracti ons o f h i gh deg rees o f poly m er izati on . A nal y tica Chi m ica A cta , 2006, 563(1/2):33 43. 2

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由表3可知, 料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间等四个因素对PC 的提取效果均有显著影响, 而料液比和提取温度对其有着极显著影响。由表2分析可得, 影响PC 提取效果的顺序为:A >C >B>D , 且A 2B 1C 2D 3为最佳方案, 即为正交实验设计表中的第4号试验, 在该试验条件下, PC 的提取率为9. 84%, 均高于其它各组试验所得提取率, 试验结果合理可行。

2. 4 提取次数的确定

由图6可知, 随着提取次数增加, PC 提取率也有所增加。但当提取次数大于3次时, 曲线趋势已趋于平缓, 即PC 提取率增加并不明显。从溶剂用量和操作时间综合考虑, 确定提取次数为3次。

图6 提取次数对提取效果的影响

F i g 6 Effect o f ex tracti ng ti m es on t he y i e l d of proantho

cyanidi ns

Vol 22 刘 莹等:褐蘑菇提取物对四氧嘧啶型糖尿病小鼠降血糖活性研究

325

表3 褐蘑菇提取物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响

T ab l e 3 The i m pact o f brown mushroom ex tract base of all oxan i nduced tetraoxypyr i m idi ne blood sugar i n diabetic m i ce

组别

C roup 正常对照组模型对照组褐蘑菇提取物低剂量组褐蘑菇提取物中剂量组褐蘑菇提取物高剂量组阳性对照组(消渴丸) *:p

n [1**********]0

剂量M g /kg. d

Dose

--[1**********]0

血糖浓度mm ol/L

B loud s ugar 4. 991#0. 82719. 462#1. 84016. 522#2. 224*15. 516#1. 706*16. 163#2. 759*14. 832#1. 825*

**

降低率%

Rate of reduction

15. 120. 216. 925. 1

由表3的实验结果可见, 褐蘑菇提取物能显著降低四氧嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。褐蘑

菇提取物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降血糖率分别是16. 9%, 20. 2%和15. 1%。同时, 表中数据显示褐蘑菇提取物中剂量组降血糖效果要优于高、低剂量组。

2

N ortheast N o r m al Un i v (东北师范大学), P h D. 2007. L i u Y (刘莹), Zhang LP (张丽萍) , Study on m et hods of deprote i n izati on fro m po rtobe llo m ushroo m po l ysaccha ri de . Guangdon g A gric Sci (广东农业科学) , 2008, 221:114 115. 3 Fu BQ (傅博强) , X ieM Y (谢明勇) , Zhou P (周鹏). A sur

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6 Y u j (余杰), Cu i P J(崔鹏举), Cen M Z (陈美珍). Se len i

u m enriched fer m enta ti on m yce lia of Copri nus co m a t us en hance the antihyper g lyce m i a and antiox idant acti v ities i n a l lox an i nduced d i abeti c m ice . M ycosy ste ma (菌物学报), 2009, 28:120 128.

4 结论

本论文通过对碱提褐蘑菇提取物降血糖作用的

研究, 得出实验结果如下:

4. 1 褐蘑菇提取物能显著降低四氧嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。4. 2 褐蘑菇提取物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降糖率分别是16. 9%, 20. 2%和15. 1%.同时, 从数据中能够看出褐蘑菇提取物中剂量组降糖效果要优于高、低剂量组。有无临床应用价值有待进一步深入研究。

参考文献

1 L i u Y (刘莹). Nutriti ona l co m ponen t ana l ysis and corn stra w m a terial f o r cu lti va ti on research of portobell o m ushroom .

(上接第342页)

8 Chang Sub K u , Sung PhilM un . Character i zati on of proantho

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天然产物研究与开发N at Prod R es Dev 2010, 22:339 342, 325

文章编号:1001 6880(2010) 02 0339 04

红松树皮中原花青素提取工艺研究

宋应华, 陶 冶, 罗小武

1

*21

重庆工商大学环境与生物工程学院, 重庆400067; 2煤炭科学研究总院重庆研究院, 重庆400037

摘 要:采用溶剂回流提取的方法, 以红松树皮中原花青素的提取率为考察指标, 考察了提取溶剂种类、溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间、提取次数等因素对原花青素提取效果的影响。通过正交实验, 确定红松树皮中原花青素的最佳提取工艺条件为:提取溶剂60%乙醇, 提取温度50 , 料液比1:7, 提取时间60m i n 。关键词:红松; 原花青素; 提取中图分类号:R 284. 2; T S202. 3

文献标识码:A

Extracti ng Process of Proanthocyani di ns fro m P i nus koraiensis Bark

SONG Y ing hua , TAO Y e , L UO X i a o wu

1

1*21

Institute of Environ m ental and B iology Engineer i ng, Chongq i ng T echnology and Business Universit y, Chongqing 400067, China; 2Chongqing Research Instit u te of Chi nese Coal R esearch Institute , Chongqing 400037, China

Abstract :T he so lvent refl ux ex tracti on process for proanthocyanidi ns from P i nus koraiens is Bark was opti m i zed by o r thogona l desi gn w ith L 9(34) mode. l The ex tracti on yie l d o f proan t hocyan i d i nsw as regarded as the i ndex of exa m i nati on . T he i nfl uence of the extraction so lvent concentrati on , te m pe ra t ure , soli d liqu i d ra tio and ex trac ti ng ti m e w ere i nvestigated here i n . O pti m u m extraction conditi onsw ere deter m i ned as f o ll ow s :ex tracti ng so lvent w as 60%ethano, l ex tracti ng te m pe r at ure w as 50 , so li d liquid ra ti o w as 1 7, ex tracti ng ti m e w as 60m i n and ex tracti ng thr i ce . K ey word s :P i nu s koraiensis ; proanthocyan i d i ns ; ex tract

原花青素(PC ) 是广泛存在于植物界中的聚多酚类物质, 分布于植物的叶、花、果、皮内。松树[7 9]皮提取物的主要成分是水溶性极高的PC 低聚物(OPC ), 同时还含有多种对人体有用的生物活性成分, 具有显著的清除自由基、抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、防辐射及抗突变等多种生理功效, 具有良好的开发前景。本文以我国浙江地区引进种植的美国红松树皮为原料, 采用溶剂回流提取法, 对红松树皮中所含PC 进行提取。在单因素试验的基础上, 采用正交试验方案, 以PC 提取率为参考指标, 对红松树皮PC 的溶剂回流提取工艺进行优选, 得出了红松树皮PC 溶剂回流提取工艺的最佳参数组合。

[1 6]

限公司友情提供。

试剂:PC 标准品, 成都曼思特生物科技有限公司; 甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、盐酸硫酸铁铵, 均为分析纯。

主要仪器:9FZ 35A 型多用植物粉碎机, 四川国营简阳机械厂; UV1102型紫外/可见分光光度计, 上海天美科学仪器有限公司; PL203型电子天平, 瑞士梅特勒 托利多公司; HH 型恒温水浴, 江苏金坛市中大仪器厂。1. 2 实验方法

1. 2. 1 松树皮中PC 的提取方法

准确称取粉碎后的松树皮10g 于250mL 圆底烧瓶中, 在一定料液比、溶剂浓度和温度条件下热回流提取一定时间, 取出过滤, 减压浓缩, 将浓缩液定容, 测定溶液中PC 含量。分别对溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间进行单因素试验。在单因素试验的基础上, 以溶剂浓度、提取温度、时间、料液比设计L 9(3) 正交试验(见表1), 探讨最佳提取工艺。为了提高试验精度, 每号试验均重复两次。

4

1 材料与方法

1. 1 材料及仪器

原料:美国红松树皮由湖州恩贝希生物原料有

收稿日期:2009 09 02 接受日期:2009 10 27

基金项目:重庆市科委自然科学基金计划资助项目(CSTC,

2009BB7374); 重庆工商大学青年科研基金项目(0752004)

*通讯作者Te:l 023 62769785; E m ai:l yh s w j yh s @126. com

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表1 正交实验的因素和水平

天然产物研究与开发 Vol 22

剂, 结果见图1。

T ab l e 1 Fac t o rs and l eve l s of the o rt hogona l experi m ent

因素

水平

A 料液比

(g /mL ) 1 51 71 9

B 乙醇浓度(%)

607080

C 提取温度D 提取时间

( ) (m i n )

405060

405060

123

本文以所提取PC 的质量分数表示提取率, 即

每100g 松树皮中经提取得到的PC 量。1. 2. 2 PC 含量的测定! ! ! 正丁醇 盐酸法

[10]

图1 不同提取溶剂对提取效果的影响

F ig 1 Effect o f extracting so l vents on the y i e l d of proan

thocyani d i ns

1. 2. 2. 1 标准曲线的绘制

精确称取一定质量PC 标准品, 用无水乙醇溶解并定容, 将其稀释成不同浓度, 分别取1mL 不同浓度的PC 标准品溶液于25mL 具塞试管中, 分别加入6mL 正丁醇 浓盐酸(v /v=95 5) 和0. 2m L 2%盐酸 硫酸铁铵溶液, 摇匀后, 于95 水浴中加热40m in , 然后用自来水迅速冷却至室温。以空白为对照, 用紫外分光光度计在550nm 处测出其吸光度值, 所取标准溶液的浓度和吸光度数据经回归处理, 回归方程A bs =0. 0028c +0. 0155, R =0 9931。结果表明, PC 在22~110ug /mL范围内具良好的线性关系。1. 2. 2. 2 PC 含量测定

取1mL 粗提物样液进行稀释, 定容。取上述溶液1mL 于具塞试管中, 分别加入6mL 正丁醇 浓盐酸(v /v=95:5) 和0. 2mL2%盐酸 硫酸铁铵溶液, 摇匀后, 于95 水浴中加热40m i n , 然后用自来水迅速冷却至室温。以1mL 乙醇代替提取液重复上述操作, 作为参比液, 用紫外分光光度计在550nm 处测出其吸光度值, 并根据回归方程计算待测液中的PC 含量, 从而根据式(1) 计算出PC 提取率。

∀m ∀v 1000

y(%) =

w ∀1000

(1)

2

由图1可知, 采用蒸馏水提取的效果较差, 而乙醇的效果最好。由于丙酮、乙酸乙酯等均有一定毒性, 若去除不完全会对人体造成伤害, 而水的提取效果太差, 从安全、经济的角度考虑, 本实验选择乙醇作为松树皮PC 的最佳提取溶剂。2. 2 单因素实验

考察了提取溶剂浓度、提取温度、固液比和提取时间等因素对PC 提取率的影响, 以确定较佳工艺条件, 结果如图2~5所示。

图2 乙醇浓度对提取效果的影响

F i g 2

E ffect of ethano l concen trati on on t he y i e l d o f proan t hocyan i d i ns

由图2可见, 随着乙醇浓度增加, PC 提取率增大。当乙醇浓度为70%时, PC 提取率最高, 如继续增大乙醇浓度, 则可能会使一些醇溶性杂质和亲脂性较强成分溶出增加, 导致PC 提取率有所下降, 同时, 乙醇浓度过高, 还会增加后续减压浓缩回流操作时间, 增加原料和操作成本, 因此, 以70%乙醇对PC 进行提取较为适宜。

由图3可见, 随着温度的升高, PC 的提取率呈先上升后下降的趋势, 当温度为50 时, PC 的提取率最高, 如温度进一步升高, 则将破坏活性成分, 使PC 的提取率下降。因此, 确定50 为松树皮PC 提式中, c 为由回归方程计算得到的浓度, ug /mL;m 为稀释倍数; v 为待测液体积, m L ; w 为称取松树皮质量, g 。

2 结果与讨论

2. 1 提取溶剂的确定

在热回流提取条件下, 选用相同浓度的乙醇、乙

,

Vol 22 宋应华等:红松树皮中原花青素提取工艺研究

341

PC 提取率也会相应地增加, 当料液比为1:7(g /mL)时, 如溶剂用量继续增加, 则PC 的提取率增加并不明显。考虑到溶剂消耗, 选用1:7

为适宜料液比。

图5 提取时间对提取效果的影响

F i g 5 E ffec t of extracti ng ti m e on the y ie l d o f proan t hocy a

nidi ns

由图5可以看出, 随着提取时间的延长, PC 提取率也不断增大, 当提取时间超过50m i n 后, 松树皮内外组分浓度逐渐趋于平衡, PC 提取率增加得并不明显, 同时, 提取时间的延长还会导致其受热时间过长而变性, 故选取50m in 为最佳提取时间。2. 3 正交实验

按1. 2. 1所述L 9(3) 正交实验设计因素水平

由图4可以看出, 随着提取溶剂用量的增加,

安排, 考察松树皮中原花素的提取效果。试验结果及分析见表2和表3。

4

表2 正交实验方案及结果

T able 2 T he project and resu lt of t he orthogona l experi m ent

试验号

No .

123456789

K 1K 2K 3K 1K 2K 3

A

料液比Soli d li qu i d rati o(g/mL)1:5(1) 1:5(1) 1:5(1) 1:7(2) 1:7(2) 1:7(2) 1:9(3) 1:9(3) 1:9(3)

39. 3351. 9051. 196. 568. 658. 53

B

乙醇浓度E t hano l con centrati on (%)

60(1) 70(2) 80(3) 60(1) 70(2) 80(3) 60(1) 70(2) 80(3)

49. 4845. 7047. 248. 257. 627. 87

C

提取温度Extracti on te m perat u re( )

40(1) 50(2) 60(3) 50(2) 60(3) 40(1) 60(3) 40(1) 50(2)

45. 4850. 5646. 387. 588. 437. 73

D

提取时间Estraction ti m e(mi n) 40(1) 50(2) 60(3) 60(3) 40(1) 50(2) 50(2) 60(3) 40(1) 46. 3246. 5849. 527. 727. 768. 25

提取率Extracti on y i eld(mg /g, %) 重复I 6. 336. 676. 659. 797. 797. 888. 548. 488. 75

重复II 6. 406. 586. 709. 898. 178. 388. 538. 018. 88

合计12. 7313. 2513. 3519. 6815. 9616. 2617. 0716. 4917. 63

342

R K 2+K 2+K 2123K 2+K 2+K 2123

3∀2

22K 21+K 2+K 3S j =-CT

天然产物研究与开发 Vol 22

2. 096860. 881143. 48

0. 636768. 381128. 06

0. 856775. 851129. 31

0. 536767. 471127. 91

G = yi =142. 42

2

CT =G /(9∀2) =1126. 86

16. 621. 202. 451. 05

优水平

A 2B 1C 2D 3

表3 方差分析表T ab l e 3 The ana l y si s of var iance

方差来源

S ource

A B C D 误差

偏差平方和

S 16. 621. 202. 451. 050. 33

05(

3 结论

F 比F

显著性S i g

自由度 22229

均方M S 8. 310. 601. 230. 530. 037

01

通过单因素和正交实验设计, 考虑各因素对PC 提取效果的影响, 红松树皮中PC 提取的最佳工艺条件为:提取溶剂60%乙醇, 提取温度50 , 料液比1 7, 提取时间60m i n , 提取3次。

参考文献

1 Le Bourvell ec , P i cot C , R enard M, et al . S ize exc l usi on chro

225. 59***16. 22

**

33. 24***14. 32

**

F 0, 9) =3. 01F 0. 10(2.

(2, 9) =16. 39

2, 9) =4. 26F 0. (2, 9) =8. 02F 0. 001

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由表3可知, 料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间等四个因素对PC 的提取效果均有显著影响, 而料液比和提取温度对其有着极显著影响。由表2分析可得, 影响PC 提取效果的顺序为:A >C >B>D , 且A 2B 1C 2D 3为最佳方案, 即为正交实验设计表中的第4号试验, 在该试验条件下, PC 的提取率为9. 84%, 均高于其它各组试验所得提取率, 试验结果合理可行。

2. 4 提取次数的确定

由图6可知, 随着提取次数增加, PC 提取率也有所增加。但当提取次数大于3次时, 曲线趋势已趋于平缓, 即PC 提取率增加并不明显。从溶剂用量和操作时间综合考虑, 确定提取次数为3次。

图6 提取次数对提取效果的影响

F i g 6 Effect o f ex tracti ng ti m es on t he y i e l d of proantho

cyanidi ns

Vol 22 刘 莹等:褐蘑菇提取物对四氧嘧啶型糖尿病小鼠降血糖活性研究

325

表3 褐蘑菇提取物对四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠血糖的影响

T ab l e 3 The i m pact o f brown mushroom ex tract base of all oxan i nduced tetraoxypyr i m idi ne blood sugar i n diabetic m i ce

组别

C roup 正常对照组模型对照组褐蘑菇提取物低剂量组褐蘑菇提取物中剂量组褐蘑菇提取物高剂量组阳性对照组(消渴丸) *:p

n [1**********]0

剂量M g /kg. d

Dose

--[1**********]0

血糖浓度mm ol/L

B loud s ugar 4. 991#0. 82719. 462#1. 84016. 522#2. 224*15. 516#1. 706*16. 163#2. 759*14. 832#1. 825*

**

降低率%

Rate of reduction

15. 120. 216. 925. 1

由表3的实验结果可见, 褐蘑菇提取物能显著降低四氧嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。褐蘑

菇提取物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降血糖率分别是16. 9%, 20. 2%和15. 1%。同时, 表中数据显示褐蘑菇提取物中剂量组降血糖效果要优于高、低剂量组。

2

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4 结论

本论文通过对碱提褐蘑菇提取物降血糖作用的

研究, 得出实验结果如下:

4. 1 褐蘑菇提取物能显著降低四氧嘧啶所制备的糖尿病小鼠血糖浓度。4. 2 褐蘑菇提取物高、中、低剂量组对糖尿病小鼠的降糖率分别是16. 9%, 20. 2%和15. 1%.同时, 从数据中能够看出褐蘑菇提取物中剂量组降糖效果要优于高、低剂量组。有无临床应用价值有待进一步深入研究。

参考文献

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(上接第342页)

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