《造巫医荭》！Ｑ！！生！旦筮！！鲞笠！翅』望！堑！查丛塑，丛！堕！！！！！：！！！：！！：堕！：兰
・１８３・
抗体文库展示技术在抗体新药开发中的应用
张磊，李金阳，朱克旭
【关键词】
抗体药物；人源化抗体；抗体文库；亲和成熟
【中图分类号】Ｒ３９２．３３【文献标识码】Ａ【文章编号】１００８－７０４４（２０１３）０２－０１８３－０３
１９７５年，Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ将分泌抗体的Ｂ细胞和骨髓瘤细胞融合，用杂交瘤细胞培养生产单克隆抗体…。随后，１９８６年，美国食品药物管理局（ＦＤＡ）批准了第一个用于治疗的单克隆抗体‘２１，一种定位于人类的ＣＤ３的鼠源抗体。由于鼠源抗体具有免疫原性，导致在人体内迅速地被清除，从而表现为低效率治疗效果，高风险的输液反应，因此，除２００２年的定位于ＣＤ２０，治疗Ｎｏｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎｌｙｍｐｈｏｍａ的Ｚｅｖａｌｉｎ以外‘３ｊ，ＦＤＡ没有再批准任何的鼠源抗体。１９９４年，第二个治疗性抗体由ＦＤＡ批准上市，ＲｅｏＰｒｏＭｌ，ａｎｔｉ—ＧｐＩＩｂ／ｇｐＩＩａ，治疗心血管疾病，抗体的类型为嵌合型抗体，标志着抗体的发展有了明显的倾向一人源化。１抗体人源化的历程
随着对抗体结构认识的深入，鼠源抗体局部到整体的人源化逐步实现经历了３个过程。（ａ）首先出现的是Ｆｃ片段被人源化，保留鼠源的Ｆａｂ。Ｆａｂ是负责抗体与抗原识别的区域‘５Ｊ，而Ｆｃ是控制抗体体内效应功能的部分。（ｂ）将鼠源的Ｆｖ区和人源的恒定区相连，减小了鼠源片段的大小，这样的抗体称为人鼠嵌合抗体。嵌合抗体能够极大的减小免疫原性，接受抗体治疗体内产生人抗鼠抗体（ｈｕｍａｎ
ａｎｔｉ—ｍｏｕｓｅ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＨＡＭＡ）的患者比例’６１可以显著降低。（ｃ）将鼠源抗体的ＣＤＲ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ
ｒｅｇｉｏｎ）区移植到同
源的人类抗体３－ｓｈｅｅｔ骨架区（ＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ）０７３，能够继续减低产生ＨＡＭＡ的风险。ＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ的抗体被称为人源化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ）Ｅｓ－９３。事实上，人源化抗体仅仅只是比嵌合抗体免疫原性低。
如今，用于治疗的全人化抗体也已经产生，即完整抗体全部都是来源于人的基因。目前产生全人化抗体有２种方法，分别是重组抗体文库的不断突变与筛选和转基因动物。１““ｏ，涉及展示技术在内的多种新技术。
２通过重组抗体文库突变与筛选获得全人化抗体
由重组抗体文库分离产生抗体原理上模拟体内产生抗体的过程，多种选择平台均包含免疫系统产生抗体的几个关键步骤：首先是通过克隆多样化连接的抗体基因，构建抗体基因文库。然后，应用不同的展示技术，表达抗体基因，将抗体的基因型和表型偶联。再然后是通过抗原作用，施加选择压力，挑选合适的抗体。最后，扩增筛选出来的抗体。将获得的抗体基因进行突变处理，用于新一轮的筛选，如此循环，直至获得满意的抗体。
２．１重组抗体文库总体上包括２种类型：第１种是从免疫
【作者单位】安徽省滁州市食品药品检验所生测室，２３９０００【作者简介】张磊（１９８４一），男，安徽滁州市人，药师，研究生。
万方数据
的动物或者是自然感染的人体内分离得到的，针对于某种抗原，具有一定程度特异性的免疫抗体基因库¨“。第２种是由非免疫来源或者是半合成的非免疫抗体基因库，不具有倾向性。
２．１．１免疫抗体文库首先从Ｂ细胞中ＰＣＲ扩增出抗体的重链和轻链群，然后将它们连入合适的载体表达随机的联合抗体文库。相比于杂交瘤技术，用相同的免疫供体，重组免疫文库的方法可以获得更多的抗体，并且可以用体外选择来富集天然很稀少的抗体类型。免疫文库能够用于分离非免疫文库不容易产生的人体免疫和疾病相关的特殊性质的抗体，同时还可以用于分子水平的体液免疫系统的研究。如果需要，用免疫文库的方法可以保持天然细胞内重链和轻链的连接，也可以高通量的扩增出单个细胞内的重链和轻链。
２．１．２非免疫文库来源于非免疫供体或者是半合成的抗体文库并不针对于某一种特定的抗原，因此它们能够用于分离针对于各种各样不同性质抗原的抗体。非免疫抗体库起源于天然的、未免疫的重组Ｖ区基因，文库减少了抗原倾向性，能够用于分离免疫文库很难获得的针对自身抗原的抗体。完全合成抗体文库是完全于体外构建，合成的多样性避免了体内天然抗体库的倾向性和抗体冗余的影响，允许人工对Ｖ区基因遗传组成和抗体多样性程度的控制。１“。半合成的抗体库继承了天然抗体库和完全合成抗体库的优点：增加了天然抗体库的多样性，而保持了一定程度上功能的多样性。２．２抗体文库筛选技术
２．２．１噬茵体展示Ｆｄ和Ｍ１３噬菌体展示是用于抗体文库展示和筛选使用最广泛的方法。将抗体片断表达于噬菌体分子表面，它的编码基因融合于噬菌体的一个包膜蛋白克隆进入能够被包装成为噬菌体颗粒的载体之中。最常用的系统是：（ａ）使用方便、筛选更高亲和力抗体的单价展示，（ｂ）通过直接融合或者二硫键桥将抗体与小衣壳蛋白ｐＩＩＩ连接，（Ｃ）同时用相比噬菌体载体更容易克隆的噬菌粒去操作。
目前，噬菌体展示技术已经成功的应用于如下几个方面：非免疫和合成抗体文库高亲和力抗体的分选¨“，包括针对于人体自身抗原的抗体的分选，通过亲和成熟体外产生皮摩尔级亲和力抗体Ｈ“，从动物或人类供体的免疫或者非免疫文库中发现独特性质的抗体¨…。
２．２．２核糖体和ｍＲＮＡ展示在核糖体展示中，核糖体将抗体和编码的ｍＲＮＡ联系在一起，在翻译结束以前，核糖体被停止住，而不释放出多肽。整个三元复合物作为整体用于筛选ⅢＪ。嘌呤霉素作为转换分子建立抗体和ｍＲＮＡ之间的共
价键。
核糖体展示技术是较新的方法，它依赖于抗体片断与编
《整塑医药》！Ｑ！！生！旦筮！！鲞筮！期』旦！！ｉ！！ｉ丛旦，丛！望！！Ｑ！！：ｙ！！：！！：盟！：！
码抗体的ｍＲＮＡ形成稳定的复合物，分离ｍＲＮＡ，然后扩增，获得抗体的基因。这种方法已经成功应用于抗体的亲和成熟领域‘１８驯。
２．２．３微生物细胞展示
酵母细胞展示技术将抗体与酵母
细胞壁上定位的Ｏｔ－凝集素酵母黏附受体相融合，展示于细胞表面。此种方法用于构建人类非免疫ｓｃＦｖ文库，获得了超过１０９克隆，能够有效的用磁珠选择然后流式细胞术分选产生几纳摩尔亲和力的抗体旧“。噬菌体展示和酵母展示相结合Ｂ…，使用酵母细胞交配体系产生组合多样性约１０”克隆数的文库。
酵母细胞表面展示技术可以结合流式细胞分选来筛选抗体文库心１’引。运用随机突变的方法来使得ＶＨ和ＶＬ基因多样化，酵母展示可以获得最高亲和力的任何抗体（４８ｆＭ）ⅢＪ。２．２．４其他筛选平台直接进化的平台包括逆转录病毒展
示‘引，慢病毒展示‘蚓，淋巴细胞展示㈣和体外区域化的微珠
展示旧。等。虽然这些方法都有特定的理论优势，由于不同的原因，他们用于抗体文库筛选的有效性仍然受到限制，而且理论的优势尚待实验检测。
２．３
筛选抗体文库的方法筛选过程大致如下，噬菌体展示
首先将抗体融合的噬菌体暴露于抗原分子，允许抗原特异性的噬菌体抗体结合。然后将结合的噬菌体洗脱感染细菌细胞。原则上只需一轮筛选，但是每一轮选择过程都会有非特异性结合的影响，因此，多次循环的选择和扩增才能够从文库中选出最好的结合物。对于核糖体展示技术最好使用纯化的抗原，而酵母细胞展示技术比较适合于细胞分选。
体外展示技术原理上可以直接用自动化来操作，进化过程主要依赖于对污染和非特异性扩增非常敏感的ＰＣＲ反应，而没有复杂的宿主细胞和噬菌体操作，体外区域化的核糖体展示和微珠展示都可以很容易通过自动化操作。
２．４抗体的亲和成熟抗体的效果主要由与抗原作用的亲和力所决定，体内免疫系统中，抗体的亲和成熟是通过逐步的引入突变后，在不断增加的选择压力下选择突变体来实现的。体外最初和最简单的亲和成熟，是在与抗原相互作用紧密相关的若干残基ＣＤＲｓ中，用寡聚核苷酸和ＰＣＲ导入多样性构建抗体文库，鉴定筛选最高亲和力的单克隆心…。在突变热点和结构分析得到的影响亲和力重要位点的随机突变，也是一种引入新突变体的有效方法。集中位点突变的优点是开始只有很小的文库需要筛选，但是，缺点是需要同时结合筛选抗体的亲和力和动力学特性。
综上所述，体外产生人源化抗体的过程就是首先构建抗体展示文库，包括免疫文库和辅助合成的非免疫文库，运用噬菌体展示、酵母展示或者核糖体展示技术等，将抗体展示到固定化的抗原结合，通过优化条件的温浴、结合和洗涤、洗脱过程，自动化的筛选合适亲和力和动力学特性的抗体。目前而言，展示技术还不能广泛的应用于完整ＩｇＧ抗体的展示，需要首先片断化展示后重建完整抗体分子。一轮文库抗体展示筛选往往会因为非特异性的结合或亲和力低下等原因，不能得到适合于诊断或治疗的满意分子。类似于体内的亲和成熟过程可以进行多次累积的突变和筛选，集中位点的突变和特异
万方数据
条件下筛选大范围突变分子２种方法可以用来改善抗体的结合特性，重复的突变与筛选过程相结合可以得到高亲和力的人源化抗体分子。
【参考文献】
［１］
ＫｏｈｌｅｒＧ，ＭｉｌｓｔｅｉｎＣ．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６（５５１７）：
４９５－４９７．
［２］ＡｎＺ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ—ａｐｒｏｖｅｎａｎｄｒａｐｉｄｌｙｅｘｐａｎｄｉｎｇｔｈｅｒａ－ｐｅｕｔｉｃｍｏｄａｌｉｔｙｆｏｒｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ＆Ｃｅｌｌ，２０１０，１（４）：
１９．３０．
［３］Ｇｒｉｌｌｏ－Ｌ６ｐｅｚ，ＪＡ．Ｚｅｖａｌｉｎ：ｔｈｅ
ｆｉｒｓｔｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙａｐｐｒｏｖｅｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｌｙｍｐｈｏｍａ
Ｅｘｐｅｒ【Ｒｅｖｉｅｗｏｆ
ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ
［Ｊ］．２００２，２（５）：４８５－４９３．
［４］Ｈｕｄｓｏｎ
ＰＪ，ＳｏｕｆｉａｕＣ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＮａｔＭｏｄ，２００３，９
（１）：１２９－１３４．
［５］Ｓｅｌｄｏｎ
ＴＡ，ＨｕｓｈｅｓＫＥ，Ｍｕｎｓｔｅｒ
ＤＪ，ｅｔａ１．ＩｍｐｒｏｖｅｄＰｒｏｔｅｉｎ—Ａｓｅｐ・
ａｒａｔｉｏｎｏｆＶＨ３
Ｆａｂｆｒｏｍ
ＦｃａｆｔｅｒＰａｐａｉｎ
Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
［Ｊ］．Ｊ
Ｂｉｏｍｏｌ
Ｔｅｃｈ，２０１ｌ，２２（２）：５０－５２．
［６］Ｍａｔｅｏ
Ｃ，ＭｏｒｅｎｏＥ，ＡｍｏｕｒＫ，ｅｔ
ａ１．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｍｏｕｓｅｍｏｎｏ—
ｃｌｏｎａｌ
ａｎｔｉｂｏｄｙｔｈａｔｂｌｏｃｋｓｔｈｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｒｅ－
ｃｏｖｃｒｙｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，３（１）：
７１名１．
［７］ＧａｏＪ，ＬｉＢ，ＬｉＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｆｕｌｌｙ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｍａｌｌａｎｔｉ—ＨＥＲ２ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｊ］．ＢＭＢＲｅｐ，２００９，４２（１０）：
６３６＿６４１．
［８］
ＫｔｉｇｌｅｒＭ，ＳｔｅｉｎＣ，ＳｃｈｗｅｎｋｅｒｔＭ，ｅｔａ１．Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｈｕｍａｎｉｚａ．
ｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｓｉｎｇｌｅ・・ｃｈａｉｎＦｖａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｈｕｍａｎｌｙｒｅ－
ｐｈｏｅｙｔｅ
ａｎｔｉｇｅｎＣＤｌ９ｂｙｄｅｓｉｇｎｅｄｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ
ｏｎｔｏ
ａ
ｈｕｍａｎｆｒａｍｅｗｏｒｋ［Ｊ］．ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇＤｅｓＳｅｌ，２００９，２２（３）：
１３５．１４７．
［９］Ｈｏｕ
Ｓ，Ｌｉ
Ｂ，ＷａｎｇＬ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａｎ
Ａｎｔｉ—ＣＤ３４Ｍｏｎｏ—
ｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ
ｂｙ
Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＲｅｇｉｏｎ
ＧｒａｆｔｉｎｇＢａｓｅｄ
ｏｎ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ，
２００８，１４４（１）：１１５—１２０．
［１０］ＬｏｎｂｅｒｇＮ．Ｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｆｒｏｍ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，３２：１１１７一１１２５．
［１１］ＫａｃｓｋｏｖｉｃｓｃＩ，ＣｅｒｖｅｎａｋＪ，ＥｒｄｅｉＡ，ＧｏｌｄｓｂｙＲＡ，Ｂｕｔｌｅｒ４ＪＥ．Ｒｅｃｅｎｔ
ａｄｖａｎｃｅｓｕｓｉｎｇＦｅＲｎｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ＇。ａｎｉｍａｌｓ
ｔｏ
ｏｖｅｒ－
ｃｏｍｅｉｍｐｅｄｉｍｅｎｔｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
ｔｏ
ｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ
ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＭＡｂｓ，２０１１，３（５）：４３１－４３９．
［１２］聂艳桃，何太平，雷韬，等．免疫抗体文库的构建及亚ｎＭ高亲
和力人源抗体的筛选［Ｊ卜中国生物制品学杂志，２０１０，３２（１２）：
１２．
［１３］Ｗｉｎｔｅｒ
Ｇ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
Ｃ．Ｍａｎ—ｍａｄｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３４９
（６３０７）：２９３・１９９．
、．
［１４］ＦｉｎｌａｙＷＪＪ，Ｂｌｏｏｍ
Ｌ，ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＯ，ｅｔａ１．ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ：ＡＰｏｗ－
ｅｒｆｕｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｔｈｅＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｉｇｈＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙＡｆｆｉｎｉｔｙＲｅａ—
ｇｅｎｔｓｆｒｏｍ
Ａｈｅｍａｔｉｖｅ
Ｉｍｍｕｎｅ
Ｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＭｏｌＢｉｏｌ，
２０１ｌ，６８１：８７－１０１．
［１５］ＫｏｉｄｅＡ，ＴｅｒｅｓｈｋｏＶ，ＵｙｓａｌＳ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｍｉｎｉ．
ｍａｌｉｓｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ：ｉｎｔｅｒｆａｃｅｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ
ａｎｄａｆｆｉｎｉｔｙ
ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
ｔｏ
ｐｉｃｏｍｏｌａｒＫＤｏｆ
ａ
ｓｉｎｇｌｄ－ｄｏｍａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈａ
ｆｉａｔｐａｒａｔｏｐｅ
§整巫医堑》！！！！生！旦筮ｉ！鲞筮！翅』坚！堂！堑丛塑：丛！竺！！Ｑ！ｉ：∑！！：ｉ！：盟！：兰
・１８５・
护患沟通在临床护理工作中的应用
方保珠
【关键词】
护患沟通；临床护理
Ｒ４７２
【中图分类号】【文献标识码】
Ａ
【文章编号】１００８－７０４４（２０１３）０２－０１８５－０３
务”的旧模式。黄丽虹‘５１对４４５名护理人员进行了护患沟通认知态度及实施需求等方面的调查，结果表明有８８％的护理人员认为护患沟通很重要，０．４５％的护理人员认为护患沟通不重要。显示临床护理人员已经普遍意识到护患沟通的重要性。但研究结果提示乐于与患者沟通的护理人员仅占约４０％，仍然有２８％的护理人员表示不愿意与患者进行沟通，而实际工作中忽视护患沟通的情况还是比较常见的。该研究结果表明多数护理人员虽然能够认为护患沟通非常重要而且很有必要，但是并不是每位护理人员都乐于并主动去和患者进
护患沟通是指护理人员与患者及其家属，以及与陪护人员之间的交流沟通，其是处理护患之间关系的主要内容…。随着现代医学模式的不断转变，护患沟通越来越被更多的人们所关注，亦越来越体现其重要性，故认识并理解护患沟通的内涵显得尤为重要。良好的护患沟通是减轻患者身心痛苦的需要，是促进护患之间理解和相互支持的需要，亦是提高患者护理效果的需要，更是构建和谐社会的需要‘２。ｏ。本文对护患沟通在临床护理工作中的应用综述如下。１护患沟通的认知现状
陈丽娜”。对１８４名住院患者进行可护患沟通的需求调查，结果显示目前护士与患者沟通频次多数为每日１到２次，而且沟通主要是集中在上午，每次沟通时间相对都比较短，少
于５ｍｉｎ的达到约５８％。研究结果显示患者渴望与护士有更
行沟通。俞霞峥。对护士和患者各２４０名进行护患沟通现状认
识的调查，结果表明影响护患沟通的原因可能主要是由于护理人员仍然沿用传统的医疗护理模式，仅仅对患者身体疾病进行治疗与护理，而往往忽视了对患者的进行心理方面的护理。显示护理人员对现代医学模式的转变并没有足够的重视，这样极易导致护士和患者之间的关系不能够在更高层次上达到和谐。此外，研究发现护理人员专业知识相对缺乏（尤其是基础理论和技能方面），同时缺乏相关的心理学知识及相应的沟通技巧，并缺乏主动捕捉及收集信息的意识，只是以完
多更好的沟通，其中约９２％的患者希望每日与护士有至少１次或更多的交谈，除在上午进行沟通，还期望在下午和晚上能有所交流，且每次沟通能达到５—１０ｍｉｎ。这些结果表明在临床护理工作中，护士要更新护理观念并改变过去的“无言服
【作者单位】安徽医科大学第一附属医院长江路急诊科，２３１０００
【作者简介】方保珠（１９８４一），女，安徽合肥市人，护师，大学。
成每天的临床治疗和护理为指导思想，而没有对自己所做的
［Ｊ］．Ｊ
Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ，２００７，３７３（４）：９４１－９５３．
ＷＥ，ＧｏｕｄｓｍｉｔＪ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙ
ａｓ
［２３］ＧｒａｙＳＡ，ＷｅｉｇｅｌＫＭ，ＭｉｌｌｅｒＫＤ，ｅｔａ１．Ｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｙ・ｂａｓｅｄｍｅｔｈ－
［１６］Ｋｒａｌｎｅｒ
ＲＡ，Ｍａｒｉｓｓｅｎ
ｏｄｓｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｓｏｌｕｂｌｅｓｃｆｖａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎｓｉｎｓｏ—
ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｍｕｎｅ
ｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｉｍ—
ｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ，２０１０，１０５（５）：９７３－９８１．［２４］Ｂｏｄｅｒ
ＥＴ，Ｍｉｄｅｌｆｏｒｔ
ｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪｌｍｍｕｎｏｌ，２００５，３５（７）：２１３１－２１４５．
Ａ．Ｒｉｂｏｓｏｍｅｄｉｓｐｌａｙ：ａ
ＫＳ，ＷｉｔｔｒｕｐＫＤ，ｅｔａ１．Ｄｉｒｅｃｔｅｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆ
ａｎ—
［１７］ＰｌＵｃｋｔｈｕｎ
ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＭｏｌＢｉ・
ｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈｍｏｎｏｖａｌｅｎｔｆｅｍｔｏｍｏｌａｒ
ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙ
Ｏｌ，２０１２，８０５：３－２８．
［Ｊ］．Ｐｒｏｃ
ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎｏｆ
ａ
ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ
ＵＳＡ，２０００，９７（２０）：１０７０１－１０７０５．
［１８］Ｈｕｆｔｏｎ
ｉｓｅｄ
ＳＥ．Ａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
ｈｕｍａｎ—
［２５］ＵｒｂａｎＪＨ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ
ｈｕｍａｎ
ＲＭ，ＣｏｍｐｔｅＭ，ｅｔａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ａｎｔｉ．ＲＡＧＥｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｒｉｂｏｓｏｍｅｄｉｓｐｌａｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈ・
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ
ｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ，２０１２，８０５：４０３－４２２．Ｒｅｓ，２００５，３３（４）：ｅ３５．
ｏｆｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙａｎｔｉ－
ＭｏｌＢｉｏｌ，
［１９］ＧｒｏｖｅｓＭＡ，ＮｉｃｋｓｏｎＡＡ．Ａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ［２６］Ｔａｕｂｅ
ｈｕｍａｎ
Ｒ，Ｚｈｕ
Ｑ，Ｘｕ
ｏｎ
Ｃ，ｅｔａ１．Ｌｅｎｔｉｖｉｍｓｄｉｓｐｌａｙ：ｓｔａｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆ
ｂｏｄｙｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇｒｉｂｏｓｏｍｅ
２０１２，８０５：１６３－１９０．
ｄｉｓｐｌａｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｈｕｍａｎｃｅｉｌｓａｎｄｖｉｒｕｓｐａｒｔｉｃｌｅｓ
［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２００８，３（９）：ｅ３１８１．
Ｐ－ｈ，ｅｔａ１．Ｒｉｂｏｓｏｍｅ
ｄｉｓｐｌａｙｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆ
ａ
［２０］Ｇｒｉｍｍ
ｍｕｒｉｎｅ
Ｓ，ＹｕＦ，Ｎｙｇｒｅｎ
［２７］Ａｌｏｎｓｏ・Ｃａｍｉｎｏ
ｄｉｓｐｌａｙ：ａｎｏｖｅｌ
Ｖ，Ｓ６ｎｃｈｅｚ—ＭａｒｔｉｎＤ，ＣｏｍｐｔｅＭ，ｅｔａ１．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
ＩｇＧ
ｏｆ
Ｆａｂｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｂｏｄｙｍｏｌｅｃｕｌｅａｌｌｏｗｉｎｇｓｐｅｃｉｅｓｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，４８
ａｎｔｉｂｏｄｙｓｅｌｅｃｔｉｏｎｐｌａｔｆｏｒｍ
ｂａｓｅｄ
ｏｎ
Ｔｃｅｌｌａｅｔｉｖａ－
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２００９，４（９）：ｅ７１７４．
［２８］Ｓｅｐｐ
Ａ，ＴａｗｆｉｋＤＳ，ＧｒｉｆｌｈｈｓＡＤ，ｅｔａ１．Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｄｉｓｐｌａｙｂｙｉｎｖｉｔｒｏ
（３）：２６３－２７６．
［２１］ＦｅｌｄｈａｕｓＭＪ，ＳｉｅｇｅｌＲＷ，Ｏｐｒｅｓｋｏ
ＬＫ，ｅｔａ１．Ｆｌｏｗ・ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ
ｉｓｏｌａ—
ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｓａｔｉｏｎ：ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｕｓｉｎｇｆｌｏｗＦＥＢＳ
ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．
ｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍ’ａｎｏｎｉｍｍｕｎｅＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉ—
ａｅ
Ｌｅｔｔ，２００２，５３２（３）：４５５－４５８．
ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｙ［Ｊ］．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，２１（２）：１６３一
［２９］Ｗｕ
ｏｆ
Ｈ，ＢｅｕｅｒｌｅｉｎＧ，ＮｉｅＹ，ｅｔａ１．Ｓｔｅｐｗｉｓｅｉｎｖｉｔｒｏａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
１７０．
Ｖｉｔａｘｉｎ，ａｎａｌｐｈａｖｂｅｔａ３－ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｕｍａｎｉｚｅｄｍＡｂ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｄ
ＳＣｉＵＳＡ，１９９８，９５（１１）：６０３７－６０４２．
［２２］ＢｅｕｃｋｅｎＴｖｄ，ＰｉｅｔｅｒｓＨ，ＳｔｅｕｋｅｒｓＭ，ｅｔａ１．ＡｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＦａｂ
Ａｃａｄ
ａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ－・ａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇｏｆｙｅａｓｔ・・ｄｉｓ・－
ｐｌａｙｅｄ
（收稿日期：２０１２－０８－０９）
ｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｌ，２００３，５４６（２－３）：２８８－２９４．
万方数据
抗体文库展示技术在抗体新药开发中的应用
作者：
作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
张磊， 李金阳， 朱克旭
安徽省滁州市食品药品检验所生测室,239000淮海医药
Journal of Huaihai Medicine2013,31(2)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hhyy201302059.aspx
《造巫医荭》！Ｑ！！生！旦筮！！鲞笠！翅』望！堑！查丛塑，丛！堕！！！！！：！！！：！！：堕！：兰
・１８３・
抗体文库展示技术在抗体新药开发中的应用
张磊，李金阳，朱克旭
【关键词】
抗体药物；人源化抗体；抗体文库；亲和成熟
【中图分类号】Ｒ３９２．３３【文献标识码】Ａ【文章编号】１００８－７０４４（２０１３）０２－０１８３－０３
１９７５年，Ｋｏｈｌｅｒ和Ｍｉｌｓｔｅｉｎ将分泌抗体的Ｂ细胞和骨髓瘤细胞融合，用杂交瘤细胞培养生产单克隆抗体…。随后，１９８６年，美国食品药物管理局（ＦＤＡ）批准了第一个用于治疗的单克隆抗体‘２１，一种定位于人类的ＣＤ３的鼠源抗体。由于鼠源抗体具有免疫原性，导致在人体内迅速地被清除，从而表现为低效率治疗效果，高风险的输液反应，因此，除２００２年的定位于ＣＤ２０，治疗Ｎｏｎ—Ｈｏｄｇｋｉｎｌｙｍｐｈｏｍａ的Ｚｅｖａｌｉｎ以外‘３ｊ，ＦＤＡ没有再批准任何的鼠源抗体。１９９４年，第二个治疗性抗体由ＦＤＡ批准上市，ＲｅｏＰｒｏＭｌ，ａｎｔｉ—ＧｐＩＩｂ／ｇｐＩＩａ，治疗心血管疾病，抗体的类型为嵌合型抗体，标志着抗体的发展有了明显的倾向一人源化。１抗体人源化的历程
随着对抗体结构认识的深入，鼠源抗体局部到整体的人源化逐步实现经历了３个过程。（ａ）首先出现的是Ｆｃ片段被人源化，保留鼠源的Ｆａｂ。Ｆａｂ是负责抗体与抗原识别的区域‘５Ｊ，而Ｆｃ是控制抗体体内效应功能的部分。（ｂ）将鼠源的Ｆｖ区和人源的恒定区相连，减小了鼠源片段的大小，这样的抗体称为人鼠嵌合抗体。嵌合抗体能够极大的减小免疫原性，接受抗体治疗体内产生人抗鼠抗体（ｈｕｍａｎ
ａｎｔｉ—ｍｏｕｓｅ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ＨＡＭＡ）的患者比例’６１可以显著降低。（ｃ）将鼠源抗体的ＣＤＲ（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ
ｒｅｇｉｏｎ）区移植到同
源的人类抗体３－ｓｈｅｅｔ骨架区（ＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ）０７３，能够继续减低产生ＨＡＭＡ的风险。ＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ的抗体被称为人源化抗体（ｈｕｍａｎｉｚｅｄａｎｔｉｂｏｄｙ）Ｅｓ－９３。事实上，人源化抗体仅仅只是比嵌合抗体免疫原性低。
如今，用于治疗的全人化抗体也已经产生，即完整抗体全部都是来源于人的基因。目前产生全人化抗体有２种方法，分别是重组抗体文库的不断突变与筛选和转基因动物。１““ｏ，涉及展示技术在内的多种新技术。
２通过重组抗体文库突变与筛选获得全人化抗体
由重组抗体文库分离产生抗体原理上模拟体内产生抗体的过程，多种选择平台均包含免疫系统产生抗体的几个关键步骤：首先是通过克隆多样化连接的抗体基因，构建抗体基因文库。然后，应用不同的展示技术，表达抗体基因，将抗体的基因型和表型偶联。再然后是通过抗原作用，施加选择压力，挑选合适的抗体。最后，扩增筛选出来的抗体。将获得的抗体基因进行突变处理，用于新一轮的筛选，如此循环，直至获得满意的抗体。
２．１重组抗体文库总体上包括２种类型：第１种是从免疫
【作者单位】安徽省滁州市食品药品检验所生测室，２３９０００【作者简介】张磊（１９８４一），男，安徽滁州市人，药师，研究生。
万方数据
的动物或者是自然感染的人体内分离得到的，针对于某种抗原，具有一定程度特异性的免疫抗体基因库¨“。第２种是由非免疫来源或者是半合成的非免疫抗体基因库，不具有倾向性。
２．１．１免疫抗体文库首先从Ｂ细胞中ＰＣＲ扩增出抗体的重链和轻链群，然后将它们连入合适的载体表达随机的联合抗体文库。相比于杂交瘤技术，用相同的免疫供体，重组免疫文库的方法可以获得更多的抗体，并且可以用体外选择来富集天然很稀少的抗体类型。免疫文库能够用于分离非免疫文库不容易产生的人体免疫和疾病相关的特殊性质的抗体，同时还可以用于分子水平的体液免疫系统的研究。如果需要，用免疫文库的方法可以保持天然细胞内重链和轻链的连接，也可以高通量的扩增出单个细胞内的重链和轻链。
２．１．２非免疫文库来源于非免疫供体或者是半合成的抗体文库并不针对于某一种特定的抗原，因此它们能够用于分离针对于各种各样不同性质抗原的抗体。非免疫抗体库起源于天然的、未免疫的重组Ｖ区基因，文库减少了抗原倾向性，能够用于分离免疫文库很难获得的针对自身抗原的抗体。完全合成抗体文库是完全于体外构建，合成的多样性避免了体内天然抗体库的倾向性和抗体冗余的影响，允许人工对Ｖ区基因遗传组成和抗体多样性程度的控制。１“。半合成的抗体库继承了天然抗体库和完全合成抗体库的优点：增加了天然抗体库的多样性，而保持了一定程度上功能的多样性。２．２抗体文库筛选技术
２．２．１噬茵体展示Ｆｄ和Ｍ１３噬菌体展示是用于抗体文库展示和筛选使用最广泛的方法。将抗体片断表达于噬菌体分子表面，它的编码基因融合于噬菌体的一个包膜蛋白克隆进入能够被包装成为噬菌体颗粒的载体之中。最常用的系统是：（ａ）使用方便、筛选更高亲和力抗体的单价展示，（ｂ）通过直接融合或者二硫键桥将抗体与小衣壳蛋白ｐＩＩＩ连接，（Ｃ）同时用相比噬菌体载体更容易克隆的噬菌粒去操作。
目前，噬菌体展示技术已经成功的应用于如下几个方面：非免疫和合成抗体文库高亲和力抗体的分选¨“，包括针对于人体自身抗原的抗体的分选，通过亲和成熟体外产生皮摩尔级亲和力抗体Ｈ“，从动物或人类供体的免疫或者非免疫文库中发现独特性质的抗体¨…。
２．２．２核糖体和ｍＲＮＡ展示在核糖体展示中，核糖体将抗体和编码的ｍＲＮＡ联系在一起，在翻译结束以前，核糖体被停止住，而不释放出多肽。整个三元复合物作为整体用于筛选ⅢＪ。嘌呤霉素作为转换分子建立抗体和ｍＲＮＡ之间的共
价键。
核糖体展示技术是较新的方法，它依赖于抗体片断与编
《整塑医药》！Ｑ！！生！旦筮！！鲞筮！期』旦！！ｉ！！ｉ丛旦，丛！望！！Ｑ！！：ｙ！！：！！：盟！：！
码抗体的ｍＲＮＡ形成稳定的复合物，分离ｍＲＮＡ，然后扩增，获得抗体的基因。这种方法已经成功应用于抗体的亲和成熟领域‘１８驯。
２．２．３微生物细胞展示
酵母细胞展示技术将抗体与酵母
细胞壁上定位的Ｏｔ－凝集素酵母黏附受体相融合，展示于细胞表面。此种方法用于构建人类非免疫ｓｃＦｖ文库，获得了超过１０９克隆，能够有效的用磁珠选择然后流式细胞术分选产生几纳摩尔亲和力的抗体旧“。噬菌体展示和酵母展示相结合Ｂ…，使用酵母细胞交配体系产生组合多样性约１０”克隆数的文库。
酵母细胞表面展示技术可以结合流式细胞分选来筛选抗体文库心１’引。运用随机突变的方法来使得ＶＨ和ＶＬ基因多样化，酵母展示可以获得最高亲和力的任何抗体（４８ｆＭ）ⅢＪ。２．２．４其他筛选平台直接进化的平台包括逆转录病毒展
示‘引，慢病毒展示‘蚓，淋巴细胞展示㈣和体外区域化的微珠
展示旧。等。虽然这些方法都有特定的理论优势，由于不同的原因，他们用于抗体文库筛选的有效性仍然受到限制，而且理论的优势尚待实验检测。
２．３
筛选抗体文库的方法筛选过程大致如下，噬菌体展示
首先将抗体融合的噬菌体暴露于抗原分子，允许抗原特异性的噬菌体抗体结合。然后将结合的噬菌体洗脱感染细菌细胞。原则上只需一轮筛选，但是每一轮选择过程都会有非特异性结合的影响，因此，多次循环的选择和扩增才能够从文库中选出最好的结合物。对于核糖体展示技术最好使用纯化的抗原，而酵母细胞展示技术比较适合于细胞分选。
体外展示技术原理上可以直接用自动化来操作，进化过程主要依赖于对污染和非特异性扩增非常敏感的ＰＣＲ反应，而没有复杂的宿主细胞和噬菌体操作，体外区域化的核糖体展示和微珠展示都可以很容易通过自动化操作。
２．４抗体的亲和成熟抗体的效果主要由与抗原作用的亲和力所决定，体内免疫系统中，抗体的亲和成熟是通过逐步的引入突变后，在不断增加的选择压力下选择突变体来实现的。体外最初和最简单的亲和成熟，是在与抗原相互作用紧密相关的若干残基ＣＤＲｓ中，用寡聚核苷酸和ＰＣＲ导入多样性构建抗体文库，鉴定筛选最高亲和力的单克隆心…。在突变热点和结构分析得到的影响亲和力重要位点的随机突变，也是一种引入新突变体的有效方法。集中位点突变的优点是开始只有很小的文库需要筛选，但是，缺点是需要同时结合筛选抗体的亲和力和动力学特性。
综上所述，体外产生人源化抗体的过程就是首先构建抗体展示文库，包括免疫文库和辅助合成的非免疫文库，运用噬菌体展示、酵母展示或者核糖体展示技术等，将抗体展示到固定化的抗原结合，通过优化条件的温浴、结合和洗涤、洗脱过程，自动化的筛选合适亲和力和动力学特性的抗体。目前而言，展示技术还不能广泛的应用于完整ＩｇＧ抗体的展示，需要首先片断化展示后重建完整抗体分子。一轮文库抗体展示筛选往往会因为非特异性的结合或亲和力低下等原因，不能得到适合于诊断或治疗的满意分子。类似于体内的亲和成熟过程可以进行多次累积的突变和筛选，集中位点的突变和特异
万方数据
条件下筛选大范围突变分子２种方法可以用来改善抗体的结合特性，重复的突变与筛选过程相结合可以得到高亲和力的人源化抗体分子。
【参考文献】
［１］
ＫｏｈｌｅｒＧ，ＭｉｌｓｔｅｉｎＣ．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆｆｕｓｅｄｃｅｌｌｓｓｅｃｒｅｔｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｏｆｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９７５，２５６（５５１７）：
４９５－４９７．
［２］ＡｎＺ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ—ａｐｒｏｖｅｎａｎｄｒａｐｉｄｌｙｅｘｐａｎｄｉｎｇｔｈｅｒａ－ｐｅｕｔｉｃｍｏｄａｌｉｔｙｆｏｒｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｅｉｎ＆Ｃｅｌｌ，２０１０，１（４）：
１９．３０．
［３］Ｇｒｉｌｌｏ－Ｌ６ｐｅｚ，ＪＡ．Ｚｅｖａｌｉｎ：ｔｈｅ
ｆｉｒｓｔｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙａｐｐｒｏｖｅｄｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｌｙｍｐｈｏｍａ
Ｅｘｐｅｒ【Ｒｅｖｉｅｗｏｆ
ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ
［Ｊ］．２００２，２（５）：４８５－４９３．
［４］Ｈｕｄｓｏｎ
ＰＪ，ＳｏｕｆｉａｕＣ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＮａｔＭｏｄ，２００３，９
（１）：１２９－１３４．
［５］Ｓｅｌｄｏｎ
ＴＡ，ＨｕｓｈｅｓＫＥ，Ｍｕｎｓｔｅｒ
ＤＪ，ｅｔａ１．ＩｍｐｒｏｖｅｄＰｒｏｔｅｉｎ—Ａｓｅｐ・
ａｒａｔｉｏｎｏｆＶＨ３
Ｆａｂｆｒｏｍ
ＦｃａｆｔｅｒＰａｐａｉｎ
Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
［Ｊ］．Ｊ
Ｂｉｏｍｏｌ
Ｔｅｃｈ，２０１ｌ，２２（２）：５０－５２．
［６］Ｍａｔｅｏ
Ｃ，ＭｏｒｅｎｏＥ，ＡｍｏｕｒＫ，ｅｔ
ａ１．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｍｏｕｓｅｍｏｎｏ—
ｃｌｏｎａｌ
ａｎｔｉｂｏｄｙｔｈａｔｂｌｏｃｋｓｔｈｅｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｒｅ－
ｃｏｖｃｒｙｏｆａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７，３（１）：
７１名１．
［７］ＧａｏＪ，ＬｉＢ，ＬｉＨ，ｅｔａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｆｕｌｌｙ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｍａｌｌａｎｔｉ—ＨＥＲ２ａｎｔｉｂｏｄｙ［Ｊ］．ＢＭＢＲｅｐ，２００９，４２（１０）：
６３６＿６４１．
［８］
ＫｔｉｇｌｅｒＭ，ＳｔｅｉｎＣ，ＳｃｈｗｅｎｋｅｒｔＭ，ｅｔａ１．Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｈｕｍａｎｉｚａ．
ｔｉｏｎｏｆ
ａ
ｓｉｎｇｌｅ・・ｃｈａｉｎＦｖａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｈｕｍａｎｌｙｒｅ－
ｐｈｏｅｙｔｅ
ａｎｔｉｇｅｎＣＤｌ９ｂｙｄｅｓｉｇｎｅｄｐｏｉｎｔｍｕｔａｔｉｏｎｓａｎｄＣＤＲ—ｇｒａｆｔｉｎｇ
ｏｎｔｏ
ａ
ｈｕｍａｎｆｒａｍｅｗｏｒｋ［Ｊ］．ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇＤｅｓＳｅｌ，２００９，２２（３）：
１３５．１４７．
［９］Ｈｏｕ
Ｓ，Ｌｉ
Ｂ，ＷａｎｇＬ，ｅｔａ１．Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ａｎ
Ａｎｔｉ—ＣＤ３４Ｍｏｎｏ—
ｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ
ｂｙ
Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＲｅｇｉｏｎ
ＧｒａｆｔｉｎｇＢａｓｅｄ
ｏｎ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ—ａｓｓｉｓｔｅｄ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ
Ｂｉｏｃｈｅｍ，
２００８，１４４（１）：１１５—１２０．
［１０］ＬｏｎｂｅｒｇＮ．Ｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｆｒｏｍ
ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，３２：１１１７一１１２５．
［１１］ＫａｃｓｋｏｖｉｃｓｃＩ，ＣｅｒｖｅｎａｋＪ，ＥｒｄｅｉＡ，ＧｏｌｄｓｂｙＲＡ，Ｂｕｔｌｅｒ４ＪＥ．Ｒｅｃｅｎｔ
ａｄｖａｎｃｅｓｕｓｉｎｇＦｅＲｎｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ＇。ａｎｉｍａｌｓ
ｔｏ
ｏｖｅｒ－
ｃｏｍｅｉｍｐｅｄｉｍｅｎｔｓｏｆｓｔａｎｄａｒｄａｎｔｉｂｏｄｙｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
ｔｏ
ｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ
ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．ＭＡｂｓ，２０１１，３（５）：４３１－４３９．
［１２］聂艳桃，何太平，雷韬，等．免疫抗体文库的构建及亚ｎＭ高亲
和力人源抗体的筛选［Ｊ卜中国生物制品学杂志，２０１０，３２（１２）：
１２．
［１３］Ｗｉｎｔｅｒ
Ｇ，Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
Ｃ．Ｍａｎ—ｍａｄｅａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９１，３４９
（６３０７）：２９３・１９９．
、．
［１４］ＦｉｎｌａｙＷＪＪ，Ｂｌｏｏｍ
Ｌ，ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍＯ，ｅｔａ１．ＰｈａｇｅＤｉｓｐｌａｙ：ＡＰｏｗ－
ｅｒｆｕｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｔｈｅＧｅｎｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｉｇｈＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙＡｆｆｉｎｉｔｙＲｅａ—
ｇｅｎｔｓｆｒｏｍ
Ａｈｅｍａｔｉｖｅ
Ｉｍｍｕｎｅ
Ｓｏｕｒｃｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＭｏｌＢｉｏｌ，
２０１ｌ，６８１：８７－１０１．
［１５］ＫｏｉｄｅＡ，ＴｅｒｅｓｈｋｏＶ，ＵｙｓａｌＳ，ｅｔａ１．Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｃａｐａｃｉｔｙｏｆｍｉｎｉ．
ｍａｌｉｓｔｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ：ｉｎｔｅｒｆａｃｅｅｎｅｒｇｅｔｉｃｓ
ａｎｄａｆｆｉｎｉｔｙ
ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
ｔｏ
ｐｉｃｏｍｏｌａｒＫＤｏｆ
ａ
ｓｉｎｇｌｄ－ｄｏｍａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙｗｉｔｈａ
ｆｉａｔｐａｒａｔｏｐｅ
§整巫医堑》！！！！生！旦筮ｉ！鲞筮！翅』坚！堂！堑丛塑：丛！竺！！Ｑ！ｉ：∑！！：ｉ！：盟！：兰
・１８５・
护患沟通在临床护理工作中的应用
方保珠
【关键词】
护患沟通；临床护理
Ｒ４７２
【中图分类号】【文献标识码】
Ａ
【文章编号】１００８－７０４４（２０１３）０２－０１８５－０３
务”的旧模式。黄丽虹‘５１对４４５名护理人员进行了护患沟通认知态度及实施需求等方面的调查，结果表明有８８％的护理人员认为护患沟通很重要，０．４５％的护理人员认为护患沟通不重要。显示临床护理人员已经普遍意识到护患沟通的重要性。但研究结果提示乐于与患者沟通的护理人员仅占约４０％，仍然有２８％的护理人员表示不愿意与患者进行沟通，而实际工作中忽视护患沟通的情况还是比较常见的。该研究结果表明多数护理人员虽然能够认为护患沟通非常重要而且很有必要，但是并不是每位护理人员都乐于并主动去和患者进
护患沟通是指护理人员与患者及其家属，以及与陪护人员之间的交流沟通，其是处理护患之间关系的主要内容…。随着现代医学模式的不断转变，护患沟通越来越被更多的人们所关注，亦越来越体现其重要性，故认识并理解护患沟通的内涵显得尤为重要。良好的护患沟通是减轻患者身心痛苦的需要，是促进护患之间理解和相互支持的需要，亦是提高患者护理效果的需要，更是构建和谐社会的需要‘２。ｏ。本文对护患沟通在临床护理工作中的应用综述如下。１护患沟通的认知现状
陈丽娜”。对１８４名住院患者进行可护患沟通的需求调查，结果显示目前护士与患者沟通频次多数为每日１到２次，而且沟通主要是集中在上午，每次沟通时间相对都比较短，少
于５ｍｉｎ的达到约５８％。研究结果显示患者渴望与护士有更
行沟通。俞霞峥。对护士和患者各２４０名进行护患沟通现状认
识的调查，结果表明影响护患沟通的原因可能主要是由于护理人员仍然沿用传统的医疗护理模式，仅仅对患者身体疾病进行治疗与护理，而往往忽视了对患者的进行心理方面的护理。显示护理人员对现代医学模式的转变并没有足够的重视，这样极易导致护士和患者之间的关系不能够在更高层次上达到和谐。此外，研究发现护理人员专业知识相对缺乏（尤其是基础理论和技能方面），同时缺乏相关的心理学知识及相应的沟通技巧，并缺乏主动捕捉及收集信息的意识，只是以完
多更好的沟通，其中约９２％的患者希望每日与护士有至少１次或更多的交谈，除在上午进行沟通，还期望在下午和晚上能有所交流，且每次沟通能达到５—１０ｍｉｎ。这些结果表明在临床护理工作中，护士要更新护理观念并改变过去的“无言服
【作者单位】安徽医科大学第一附属医院长江路急诊科，２３１０００
【作者简介】方保珠（１９８４一），女，安徽合肥市人，护师，大学。
成每天的临床治疗和护理为指导思想，而没有对自己所做的
［Ｊ］．Ｊ
Ｍｏｌ
Ｂｉｏｌ，２００７，３７３（４）：９４１－９５３．
ＷＥ，ＧｏｕｄｓｍｉｔＪ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｙ
ａｓ
［２３］ＧｒａｙＳＡ，ＷｅｉｇｅｌＫＭ，ＭｉｌｌｅｒＫＤ，ｅｔａ１．Ｆｌｏｗｅｙｔｏｍｅｔｒｙ・ｂａｓｅｄｍｅｔｈ－
［１６］Ｋｒａｌｎｅｒ
ＲＡ，Ｍａｒｉｓｓｅｎ
ｏｄｓｆｏｒａｓｓｅｓｓｉｎｇｓｏｌｕｂｌｅｓｃｆｖａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｎｔｉｇｅｎｓｉｎｓｏ—
ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓｐｅｃｉｆｉｃｆｏｒｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｍｕｎｅ
ｓｅｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍｉｍ—
ｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ，２０１０，１０５（５）：９７３－９８１．［２４］Ｂｏｄｅｒ
ＥＴ，Ｍｉｄｅｌｆｏｒｔ
ｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＥｕｒＪｌｍｍｕｎｏｌ，２００５，３５（７）：２１３１－２１４５．
Ａ．Ｒｉｂｏｓｏｍｅｄｉｓｐｌａｙ：ａ
ＫＳ，ＷｉｔｔｒｕｐＫＤ，ｅｔａ１．Ｄｉｒｅｃｔｅｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆ
ａｎ—
［１７］ＰｌＵｃｋｔｈｕｎ
ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ＭｏｌＢｉ・
ｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｉｔｈｍｏｎｏｖａｌｅｎｔｆｅｍｔｏｍｏｌａｒ
ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙ
Ｏｌ，２０１２，８０５：３－２８．
［Ｊ］．Ｐｒｏｃ
ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎｏｆ
ａ
ＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ
ＵＳＡ，２０００，９７（２０）：１０７０１－１０７０５．
［１８］Ｈｕｆｔｏｎ
ｉｓｅｄ
ＳＥ．Ａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
ｈｕｍａｎ—
［２５］ＵｒｂａｎＪＨ，Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ
ｈｕｍａｎ
ＲＭ，ＣｏｍｐｔｅＭ，ｅｔａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ａｎｔｉ．ＲＡＧＥｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｂｙｒｉｂｏｓｏｍｅｄｉｓｐｌａｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈ・
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍｒｅｔｒｏｖｉｒａｌｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ
ｏｄｓＭｏｌＢｉｏｌ，２０１２，８０５：４０３－４２２．Ｒｅｓ，２００５，３３（４）：ｅ３５．
ｏｆｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙａｎｔｉ－
ＭｏｌＢｉｏｌ，
［１９］ＧｒｏｖｅｓＭＡ，ＮｉｃｋｓｏｎＡＡ．Ａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ［２６］Ｔａｕｂｅ
ｈｕｍａｎ
Ｒ，Ｚｈｕ
Ｑ，Ｘｕ
ｏｎ
Ｃ，ｅｔａ１．Ｌｅｎｔｉｖｉｍｓｄｉｓｐｌａｙ：ｓｔａｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆ
ｂｏｄｙｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｕｓｉｎｇｒｉｂｏｓｏｍｅ
２０１２，８０５：１６３－１９０．
ｄｉｓｐｌａｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ｈｕｍａｎｃｅｉｌｓａｎｄｖｉｒｕｓｐａｒｔｉｃｌｅｓ
［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２００８，３（９）：ｅ３１８１．
Ｐ－ｈ，ｅｔａ１．Ｒｉｂｏｓｏｍｅ
ｄｉｓｐｌａｙｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆ
ａ
［２０］Ｇｒｉｍｍ
ｍｕｒｉｎｅ
Ｓ，ＹｕＦ，Ｎｙｇｒｅｎ
［２７］Ａｌｏｎｓｏ・Ｃａｍｉｎｏ
ｄｉｓｐｌａｙ：ａｎｏｖｅｌ
Ｖ，Ｓ６ｎｃｈｅｚ—ＭａｒｔｉｎＤ，ＣｏｍｐｔｅＭ，ｅｔａ１．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ
ＩｇＧ
ｏｆ
Ｆａｂｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｂｏｄｙｍｏｌｅｃｕｌｅａｌｌｏｗｉｎｇｓｐｅｃｉｅｓｓｅｌｅｃｔｉｖｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１１，４８
ａｎｔｉｂｏｄｙｓｅｌｅｃｔｉｏｎｐｌａｔｆｏｒｍ
ｂａｓｅｄ
ｏｎ
Ｔｃｅｌｌａｅｔｉｖａ－
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯｎｅ，２００９，４（９）：ｅ７１７４．
［２８］Ｓｅｐｐ
Ａ，ＴａｗｆｉｋＤＳ，ＧｒｉｆｌｈｈｓＡＤ，ｅｔａ１．Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｄｉｓｐｌａｙｂｙｉｎｖｉｔｒｏ
（３）：２６３－２７６．
［２１］ＦｅｌｄｈａｕｓＭＪ，ＳｉｅｇｅｌＲＷ，Ｏｐｒｅｓｋｏ
ＬＫ，ｅｔａ１．Ｆｌｏｗ・ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ
ｉｓｏｌａ—
ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｓａｔｉｏｎ：ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｂｉｎｄｉｎｇｕｓｉｎｇｆｌｏｗＦＥＢＳ
ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．
ｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｆｒｏｍ’ａｎｏｎｉｍｍｕｎｅＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉ—
ａｅ
Ｌｅｔｔ，２００２，５３２（３）：４５５－４５８．
ｓｕｒｆａｃｅｄｉｓｐｌａｙｌｉｂｒａｒｙ［Ｊ］．ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００３，２１（２）：１６３一
［２９］Ｗｕ
ｏｆ
Ｈ，ＢｅｕｅｒｌｅｉｎＧ，ＮｉｅＹ，ｅｔａ１．Ｓｔｅｐｗｉｓｅｉｎｖｉｔｒｏａｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎ
１７０．
Ｖｉｔａｘｉｎ，ａｎａｌｐｈａｖｂｅｔａ３－ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｕｍａｎｉｚｅｄｍＡｂ［Ｊ］．ＰｒｏｃＮａｄ
ＳＣｉＵＳＡ，１９９８，９５（１１）：６０３７－６０４２．
［２２］ＢｅｕｃｋｅｎＴｖｄ，ＰｉｅｔｅｒｓＨ，ＳｔｅｕｋｅｒｓＭ，ｅｔａ１．ＡｆｆｉｎｉｔｙｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＦａｂ
Ａｃａｄ
ａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇｍｅｎｔｓｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ－・ａｃｔｉｖａｔｅｄｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇｏｆｙｅａｓｔ・・ｄｉｓ・－
ｐｌａｙｅｄ
（收稿日期：２０１２－０８－０９）
ｌｉｂｒａｒｉｅｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｌ，２００３，５４６（２－３）：２８８－２９４．
万方数据
抗体文库展示技术在抗体新药开发中的应用
作者：
作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：
张磊， 李金阳， 朱克旭
安徽省滁州市食品药品检验所生测室,239000淮海医药
Journal of Huaihai Medicine2013,31(2)
本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_hhyy201302059.aspx