还原糖和总糖的含量测定
材料:小麦面粉;精密pH 试纸 四、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL 具塞刻度试管编号,按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作 2. 样品中还原糖和总糖的测定 (1)还原糖的提取
准确称取3.00g 食用面粉,放入100mL 烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入50mL 蒸馏水,搅匀,置于50℃恒温水浴中保温20min ,使还原糖浸出。将浸出液(含沉淀)
转移到50mL
离心管中,于4000r/min下离心5min, 沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次,再离心,将二次离心的上清液收集在100mL 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。
(2)总糖的水解和提取
准确称取1.00g 食用面粉,放入100mL 三角瓶中,加15mL 蒸馏水及10mL 6M HCl,置沸水浴中加热水解30min (水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后,加入1 滴酚酞指示剂,用6mol/LNaOH 中和至微红色,用蒸馏水定容在100mL 容量瓶中,混匀。将定容后的水解液过滤,取滤液10mL ,移入另一100mL 容量瓶中定容,混匀,作为总糖待测液。 (3)显色和比色
取4支20mL 具塞刻度试管,编号,按表2 所示分别加入待测液和显色剂,空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算:
计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值,在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数,按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
还原糖和总糖的含量测定
材料:小麦面粉;精密pH 试纸 四、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL 具塞刻度试管编号,按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂,配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作 2. 样品中还原糖和总糖的测定 (1)还原糖的提取
准确称取3.00g 食用面粉,放入100mL 烧杯中,先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入50mL 蒸馏水,搅匀,置于50℃恒温水浴中保温20min ,使还原糖浸出。将浸出液(含沉淀)
转移到50mL
离心管中,于4000r/min下离心5min, 沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次,再离心,将二次离心的上清液收集在100mL 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。
(2)总糖的水解和提取
准确称取1.00g 食用面粉,放入100mL 三角瓶中,加15mL 蒸馏水及10mL 6M HCl,置沸水浴中加热水解30min (水解是否完全可用碘-碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后,加入1 滴酚酞指示剂,用6mol/LNaOH 中和至微红色,用蒸馏水定容在100mL 容量瓶中,混匀。将定容后的水解液过滤,取滤液10mL ,移入另一100mL 容量瓶中定容,混匀,作为总糖待测液。 (3)显色和比色
取4支20mL 具塞刻度试管,编号,按表2 所示分别加入待测液和显色剂,空白调零可使用制作标准曲线的0号管。加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
五、结果与计算:
计算出7、8号管光密度值的平均值和9、10管光密度值的平均值,在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数,按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。