第13卷第2期1999年6月
山 东 轻 工 业 学 院 学 报
JOURNALOFSHANDONGINSTITUTEOFLIGHTINDUSTRYVol.13No.2
Jun.1999
酿酒酵母子囊孢子形成条件的研究
吕红线
(山东轻工业学院食品工程系 济南 250100)
王晓红
(烟台张裕白兰地分公司化验室 烟台 264000)
摘要
对三株酿酒酵母在不同的产孢子培养基、不同的活化培养基和不同的培养温度下进行了子囊形
成率的比较实验,结果表明,酿酒酵母在麦芽汁培养基上繁殖几代后,移接到产孢子培养基Ö或Õ上,在25~30e进行培养,子囊形成率最高。
关键词
酵母菌,子囊孢子,产孢子培养基
Q933
中图法分类号
酵母菌是教学、科研和工业生产中应用最广泛的真核微生物之一。酵母菌子囊孢子形成与否是酵母菌分类鉴定的一个重要依据。能否产生子囊孢子是酵母菌其遗传性决定的,但能否观察到子囊孢子与产孢条件有着密切关系。为了促使酵母菌产生子囊孢子,一般可先将菌
种接种到营养丰富的培养基上繁殖几代后,再将它移接到合适的产孢子培养基上进行产孢培养。但是不同的酵母菌产孢能力及其合适的产孢子培养基有所不同,对于产孢能力较差的酵母菌在不同的产孢子培养基上进行培养时,有时会出现产孢和不产孢两种截然不同的结论,这给酵母菌分类鉴定以及教学、科研和工业生产带来一定困难,因此,研究酵母菌子囊孢子的形成条件很有必要。本文利用酵母菌属中的三株酿酒酵母,对其子囊孢子的形成条件进行了研究。
1 材料和方法
111 菌株
酿酒酵母As21399,酿酒酵母D(本实验室保存菌种),酿酒酵母J(本实验室保存菌种)112 培养基
11211 麦芽汁培养基112
11212 酵母完全培养基
11213 麦氏(Mcclarg)培养基13211214 克氏(Kleyn)培养基132
11215 高氏(GoroclKowa)培养基132
收稿日期:1998-07-02
122
58
山 东 轻 工 业 学 院 学 报 第13卷
11216 福氏(Fowell)培养基(%):0182醋酸钠,0104棉子糖,2琼脂
11217 产孢子培养基V(%):0182醋酸钠,0118氯化钾,011酵母膏,2琼脂。11218 产孢子培养基VI(%):0182醋酸钠,0118氯化钾,2琼脂。113 菌体培养和子囊孢子的形成
11311 活化菌种:将供试菌种接种于新鲜的麦芽汁培养基或酵母完全培养基上,置28e培养24h,如此连续传代2~3次,最后一次接种于固体平板上。
11312 移接产孢子培养基:将经活化的酿酒酵母用玻璃刮刀均匀涂布于产孢子培养基平板上,置于不同温度的恒温箱中培养。114 子囊孢子染色法
11411 孔雀绿)蕃红染色法13211412 石炭酸蕃红)美兰染色法112115 子囊形成率的计算
菌株接至产孢子培养基上培养后,定期取样,在显微镜下观察子囊孢子形成的情况。计数时,随机取3个视野,分别计数含孢子的子囊和不产生孢子的细胞,按下列公式计算子囊形成率。
子囊形成率(%)=
@100%
3个视野中形成子囊的总数+不产孢子的细胞总数
2 结果与讨论
211 不同产孢子培养基、不同培养时间对子囊形成率的影响见表1。
表1 在不同产孢子培养基上不同培养时间的子囊形成率(%)*
培养时间 (h)
菌 株As21399
产孢子培养基
24
福氏麦氏产孢V产孢VI克氏高氏
酿酒酵母D
福氏麦氏产孢V
产孢VI克氏高氏
酿酒酵母J
福氏麦氏产孢V产孢VI克氏高氏
[***********][***********][***********][1**********]0
[***********][***********][***********][***********]390
[***********][***********][***********][***********]51750
[***********][***********][***********][***********]181850
*,e
第2期吕红线等: 酿酒酵母子囊孢子形成条件的研究
59
由表1可见,酿酒酵母在不同的产孢子培养基上产孢能力和产孢时间有所不同,酿酒酵母D和As21399在产孢子培养基VI和V上产孢很强,在24h即可大量产生子囊孢子,96h子囊形成率可达40%~50%;在麦氏和克氏培养基上产孢较强,24h即产生较多的子囊孢子,96h子囊形成率可达30%之多;在福氏培养基上产孢一般,24h少量产孢,72~96h才多起来,96h的子囊形成率为20%左右。
酿酒酵母J在产孢子培养基VI和V上产孢一般,24h少量生孢,96h子囊形成率达15~20%;在麦氏和克氏培养基上产孢较少,24h开始个别产孢,96h子囊形成率达10%左右;在福氏培养基上产孢更少,48h才开始个别产孢,96h子囊形成率仅为6%。
三种菌株在高氏培养基上均不产孢,而且生长旺盛,可能与其培养基成份中含有1%蛋白胨有关。
212 培养温度与子囊形成率的关系见表2,产孢子培养基利用最常用的麦氏培养基。
由表2可见,三菌株在培养温度为15e和40e时均不产孢。在20e时到72h才开始产孢。在35e时As21339和酿酒酵母D培养24h开始少量产孢,而酿酒酵母J直到96h才产孢。三菌株在25~30e时在24h即产孢,而且子囊形成率均达到最高。其原因可能是由于温度的升降使酵母细胞内多种酶的活性发生了变化,而这些酶对于子囊孢子的形成恰恰是必要的。
表2 在不同温度不同培养时间的子囊形成率(%)*
菌株As21399
培养温度(e)[1**********]0
酿酒酵母D
[1**********]0
酿酒酵母J
[1**********]0
[***********][***********]79018300
[***********][***********][1**********]000
培养时间(h)
[***********][***********][***********]16901210
[***********][***********][***********]1112421960
*活化培养基为麦芽汁培养基,产孢子培养基为麦氏培养基
213 不同活化培养基与子囊形成率的关系见表3,产孢子培养基为最常用的麦氏培养基。
由表3可见,三菌株在麦芽汁培养基和酵母完全培养基上活化后子囊形成率不同,以麦芽汁为活化培养基的子囊形成率略高,其原因可能是因酵母更适于在麦芽汁这种天然培养基上生长繁殖的缘故。
21:
60
山 东 轻 工 业 学 院 学 报 第13卷
但从染色效果来看以孔雀绿)蕃红染色法为好,其结果更为清晰。石炭酸蕃红)美兰染色法,若美兰染色时间稍长,子囊孢子就被染成紫色,与蓝色的菌体对比不够明显。
表3 不同活化培养基活化后的子囊形成率(%)*
培养时间(h)
菌株As21399酿酒酵母D酿酒酵母J
活化培养基
24
麦芽汁酵母完全麦芽汁酵母完全麦芽汁酵母完全
[***********]701830
[***********][1**********]8
[***********][1**********]2
[***********][1**********]131
*产孢子培养基为麦氏培养基,培养温度为30e
215 结论
三菌株以酿酒酵母D产孢最强,其次是As21399,酿酒酵母J产孢最低。产孢子培养基以产孢子培养基VI和V为最好,其次是麦氏和克氏培养基,再次是福氏培养基,高氏培养基不产孢。最适培养温度为25~30e。活化培养基以麦芽汁培养基为佳。因此,酿酒酵母的产孢试验以先将菌种接种到麦芽汁培养基上繁殖几代后,再移接到产孢子培养基VI或V上,在25~30e进行培养,其子囊孢子出现的时间最早,子囊形成率最高。
参 考 文 献
1 无锡轻工业学院编1微生物1北京:轻工业出版社,19881539)5962 白毓谦等1微生物实验技术1济南:山东大学出版社,198714783 祖若夫等1微生物实验教程1上海:复旦大学出版社,1993188)89
StudyonProductiveConditionsofSaccharomycesAscospores
LuHongxian WangXiaohong
(DepartmentofFoodEngineering,ShandongInstituteofLightIndustry,Jinan,250100)Abstract Inthispaper,thecomparativeexperimentsofascusproductionratioaredoneforthree-strainsaccharomycescerevisiaetoproduceascusondifferentascosperesproducingmed-i
ums.Infuencesofdifferentactivemediumsanddifferenttemperaturesonascosporesproductionarestudied.
KeyWords saccharomyces,ascospores,medium
第13卷第2期1999年6月
山 东 轻 工 业 学 院 学 报
JOURNALOFSHANDONGINSTITUTEOFLIGHTINDUSTRYVol.13No.2
Jun.1999
酿酒酵母子囊孢子形成条件的研究
吕红线
(山东轻工业学院食品工程系 济南 250100)
王晓红
(烟台张裕白兰地分公司化验室 烟台 264000)
摘要
对三株酿酒酵母在不同的产孢子培养基、不同的活化培养基和不同的培养温度下进行了子囊形
成率的比较实验,结果表明,酿酒酵母在麦芽汁培养基上繁殖几代后,移接到产孢子培养基Ö或Õ上,在25~30e进行培养,子囊形成率最高。
关键词
酵母菌,子囊孢子,产孢子培养基
Q933
中图法分类号
酵母菌是教学、科研和工业生产中应用最广泛的真核微生物之一。酵母菌子囊孢子形成与否是酵母菌分类鉴定的一个重要依据。能否产生子囊孢子是酵母菌其遗传性决定的,但能否观察到子囊孢子与产孢条件有着密切关系。为了促使酵母菌产生子囊孢子,一般可先将菌
种接种到营养丰富的培养基上繁殖几代后,再将它移接到合适的产孢子培养基上进行产孢培养。但是不同的酵母菌产孢能力及其合适的产孢子培养基有所不同,对于产孢能力较差的酵母菌在不同的产孢子培养基上进行培养时,有时会出现产孢和不产孢两种截然不同的结论,这给酵母菌分类鉴定以及教学、科研和工业生产带来一定困难,因此,研究酵母菌子囊孢子的形成条件很有必要。本文利用酵母菌属中的三株酿酒酵母,对其子囊孢子的形成条件进行了研究。
1 材料和方法
111 菌株
酿酒酵母As21399,酿酒酵母D(本实验室保存菌种),酿酒酵母J(本实验室保存菌种)112 培养基
11211 麦芽汁培养基112
11212 酵母完全培养基
11213 麦氏(Mcclarg)培养基13211214 克氏(Kleyn)培养基132
11215 高氏(GoroclKowa)培养基132
收稿日期:1998-07-02
122
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山 东 轻 工 业 学 院 学 报 第13卷
11216 福氏(Fowell)培养基(%):0182醋酸钠,0104棉子糖,2琼脂
11217 产孢子培养基V(%):0182醋酸钠,0118氯化钾,011酵母膏,2琼脂。11218 产孢子培养基VI(%):0182醋酸钠,0118氯化钾,2琼脂。113 菌体培养和子囊孢子的形成
11311 活化菌种:将供试菌种接种于新鲜的麦芽汁培养基或酵母完全培养基上,置28e培养24h,如此连续传代2~3次,最后一次接种于固体平板上。
11312 移接产孢子培养基:将经活化的酿酒酵母用玻璃刮刀均匀涂布于产孢子培养基平板上,置于不同温度的恒温箱中培养。114 子囊孢子染色法
11411 孔雀绿)蕃红染色法13211412 石炭酸蕃红)美兰染色法112115 子囊形成率的计算
菌株接至产孢子培养基上培养后,定期取样,在显微镜下观察子囊孢子形成的情况。计数时,随机取3个视野,分别计数含孢子的子囊和不产生孢子的细胞,按下列公式计算子囊形成率。
子囊形成率(%)=
@100%
3个视野中形成子囊的总数+不产孢子的细胞总数
2 结果与讨论
211 不同产孢子培养基、不同培养时间对子囊形成率的影响见表1。
表1 在不同产孢子培养基上不同培养时间的子囊形成率(%)*
培养时间 (h)
菌 株As21399
产孢子培养基
24
福氏麦氏产孢V产孢VI克氏高氏
酿酒酵母D
福氏麦氏产孢V
产孢VI克氏高氏
酿酒酵母J
福氏麦氏产孢V产孢VI克氏高氏
[***********][***********][***********][1**********]0
[***********][***********][***********][***********]390
[***********][***********][***********][***********]51750
[***********][***********][***********][***********]181850
*,e
第2期吕红线等: 酿酒酵母子囊孢子形成条件的研究
59
由表1可见,酿酒酵母在不同的产孢子培养基上产孢能力和产孢时间有所不同,酿酒酵母D和As21399在产孢子培养基VI和V上产孢很强,在24h即可大量产生子囊孢子,96h子囊形成率可达40%~50%;在麦氏和克氏培养基上产孢较强,24h即产生较多的子囊孢子,96h子囊形成率可达30%之多;在福氏培养基上产孢一般,24h少量产孢,72~96h才多起来,96h的子囊形成率为20%左右。
酿酒酵母J在产孢子培养基VI和V上产孢一般,24h少量生孢,96h子囊形成率达15~20%;在麦氏和克氏培养基上产孢较少,24h开始个别产孢,96h子囊形成率达10%左右;在福氏培养基上产孢更少,48h才开始个别产孢,96h子囊形成率仅为6%。
三种菌株在高氏培养基上均不产孢,而且生长旺盛,可能与其培养基成份中含有1%蛋白胨有关。
212 培养温度与子囊形成率的关系见表2,产孢子培养基利用最常用的麦氏培养基。
由表2可见,三菌株在培养温度为15e和40e时均不产孢。在20e时到72h才开始产孢。在35e时As21339和酿酒酵母D培养24h开始少量产孢,而酿酒酵母J直到96h才产孢。三菌株在25~30e时在24h即产孢,而且子囊形成率均达到最高。其原因可能是由于温度的升降使酵母细胞内多种酶的活性发生了变化,而这些酶对于子囊孢子的形成恰恰是必要的。
表2 在不同温度不同培养时间的子囊形成率(%)*
菌株As21399
培养温度(e)[1**********]0
酿酒酵母D
[1**********]0
酿酒酵母J
[1**********]0
[***********][***********]79018300
[***********][***********][1**********]000
培养时间(h)
[***********][***********][***********]16901210
[***********][***********][***********]1112421960
*活化培养基为麦芽汁培养基,产孢子培养基为麦氏培养基
213 不同活化培养基与子囊形成率的关系见表3,产孢子培养基为最常用的麦氏培养基。
由表3可见,三菌株在麦芽汁培养基和酵母完全培养基上活化后子囊形成率不同,以麦芽汁为活化培养基的子囊形成率略高,其原因可能是因酵母更适于在麦芽汁这种天然培养基上生长繁殖的缘故。
21:
60
山 东 轻 工 业 学 院 学 报 第13卷
但从染色效果来看以孔雀绿)蕃红染色法为好,其结果更为清晰。石炭酸蕃红)美兰染色法,若美兰染色时间稍长,子囊孢子就被染成紫色,与蓝色的菌体对比不够明显。
表3 不同活化培养基活化后的子囊形成率(%)*
培养时间(h)
菌株As21399酿酒酵母D酿酒酵母J
活化培养基
24
麦芽汁酵母完全麦芽汁酵母完全麦芽汁酵母完全
[***********]701830
[***********][1**********]8
[***********][1**********]2
[***********][1**********]131
*产孢子培养基为麦氏培养基,培养温度为30e
215 结论
三菌株以酿酒酵母D产孢最强,其次是As21399,酿酒酵母J产孢最低。产孢子培养基以产孢子培养基VI和V为最好,其次是麦氏和克氏培养基,再次是福氏培养基,高氏培养基不产孢。最适培养温度为25~30e。活化培养基以麦芽汁培养基为佳。因此,酿酒酵母的产孢试验以先将菌种接种到麦芽汁培养基上繁殖几代后,再移接到产孢子培养基VI或V上,在25~30e进行培养,其子囊孢子出现的时间最早,子囊形成率最高。
参 考 文 献
1 无锡轻工业学院编1微生物1北京:轻工业出版社,19881539)5962 白毓谦等1微生物实验技术1济南:山东大学出版社,198714783 祖若夫等1微生物实验教程1上海:复旦大学出版社,1993188)89
StudyonProductiveConditionsofSaccharomycesAscospores
LuHongxian WangXiaohong
(DepartmentofFoodEngineering,ShandongInstituteofLightIndustry,Jinan,250100)Abstract Inthispaper,thecomparativeexperimentsofascusproductionratioaredoneforthree-strainsaccharomycescerevisiaetoproduceascusondifferentascosperesproducingmed-i
ums.Infuencesofdifferentactivemediumsanddifferenttemperaturesonascosporesproductionarestudied.
KeyWords saccharomyces,ascospores,medium